新一代测序技术评估T细胞受体基因重排检测的性能优化与临床验证

本研究针对NGS平台TCR基因重排检测标准缺失的临床痛点，斯坦福医疗团队通过619例样本验证，优化了以TRG/TRB双靶点2.5% reads阈值+5×背景差的判读标准，证实现有方案灵敏度74%、特异性85%，为T细胞恶性肿瘤诊断提供客观技术规范。

　　

在T细胞恶性肿瘤诊断中，T细胞受体（TCR）基因重排的克隆性分析犹如"分子指纹"鉴定，但传统方法面临灵敏度不足、标准不统一的困境。随着新一代测序（NGS）技术的普及，斯坦福医疗中心分子病理实验室的D.W.、D.L.等研究者意识到：现有NGS平台缺乏经过大规模验证的判读标准，这可能导致临床误判。为此，团队对2020-2022年间1232例疑似T细胞增殖异常患者的样本展开回溯研究，相关成果发表在《The Journal of Molecular Diagnostics》。

研究采用Invivoscribe LymphoTrack引物组，对TRG和TRB基因重排进行双靶点NGS检测。通过分析619例有病理对照的样本，计算各克隆型reads百分比与背景差异倍数。关键创新在于建立多参数判读矩阵：当某序列占比≥2.5%且高于背景5倍时判为克隆阳性，这种定量标准较传统毛细管电泳更具客观性。

患者样本
研究纳入的样本涵盖各类T细胞增殖异常疑似病例，通过匹配病理报告构建金标准。值得注意的是，约50%样本因缺乏明确病理结论被排除，凸显此类疾病诊断的复杂性。

结果
数据显示现行标准下检测灵敏度为74%、特异性85%。受试者工作特征（ROC）曲线分析表明，调整阈值仅能边际改善性能，证实现有算法合理性。特别在双基因联合解读时，TRB（T细胞受体β链）对克隆性判定的贡献度显著高于TRG（γ链）。

讨论
研究发现假阴性多源于低频克隆或技术局限，而假阳性常与反应性增殖的生物学模糊性相关。资深作者B.M.Z.强调，该研究首次为NGS-TCR检测提供了基于大样本的验证框架，其2.5%+5×的双参数标准可作为实验室实施参考。

这项研究的意义在于：不仅证实NGS-TCR检测的临床可靠性，更揭示技术边界——当克隆频率低于检测限或存在特殊生物学背景时，仍需结合病理形态学综合判断。团队提出的标准化路径，为全球实验室建立同类检测提供了重要范本，推动T细胞恶性肿瘤诊断进入精准定量时代。