基于QTRAP-MS/MS与ZenoTOF-MS/MS联用技术的非批准药物及猫血清中活性成分结构解析与定量研究

本研究针对猫传染性腹膜炎(FIP)治疗药物Xraphconn中活性成分(API)结构不明、含量不清的问题，通过弱阳离子交换固相萃取(WCX-SPE)结合多反应监测-信息依赖性采集-增强子离子扫描(MRM-IDA-EPI)技术，首次确证其API为GS-441524，并建立4分钟超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-ESI-QTRAP-MS/MS)定量方法，为非法兽药监管及临床治疗监测提供关键技术支撑。

　　

猫传染性腹膜炎(FIP)作为由猫冠状病毒(FCoV)突变引起的致死性疾病，长期以来缺乏有效治疗手段。虽然未获批兽药Xraphconn在临床中显示出显著疗效，但其活性药物成分(API)的化学结构始终存在争议——制造商声称的MT-0901成分曾出现两种异构体结构描述，且与已知抗病毒化合物GS-441524的关联性不明。这种信息不透明不仅阻碍药物质量监管，更可能影响临床治疗效果评估。来自德国慕尼黑大学等机构的研究团队通过多维度分析技术，首次揭开了这款"黑箱药物"的神秘面纱，相关成果发表于《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》。

研究采用弱阳离子交换固相萃取(WCX-SPE)从复杂植物基质中分离API，结合三重四极杆线性离子阱质谱(QTRAP 6500+)的MRM-IDA-EPI扫描和高分辨ZenoTOF 7600的碰撞诱导解离(CID)/电子活化解离(EAD)技术解析结构，最终通过¹³
C/¹
H核磁共振(NMR)确证。建立的4分钟UHPLC-ESI-QTRAP-MS/MS方法成功分离同重杂质，并应用于6只治疗猫的血清药代动力学研究。

【结构解析】通过计算机模拟(CFM-ID)比对四种候选结构的特征碎片，排除制造商声称的MT-0901结构。QTRAP低分辨质谱显示Xraphconn API与GS-441524标准品在40-80V碰撞能量下的碎片模式高度一致。ZenoTOF高分辨CID/EAD谱进一步证实两者均含4-氨基吡咯并三嗪环，但未能区分核糖环类型。最终¹³
C NMR中HO5'与H5'的相关信号确证为呋喃糖构型，证明API实为GS-441524。

【方法优化】发现商业GS-441524标准品中存在3.4%面积的同重杂质。将流动相甲酸浓度从0.05%提升至0.15%，使API保留时间从0.94分钟提前至0.77分钟，实现基线分离。该方法在水和血浆中的定量限(LOQ)分别达6.39 nM和21.84 nM，日内/日间精度CV%≤5.51%。

【含量测定】WCX-SPE纯化后，采用¹³
C₅
-GS-441524内标校正，测得每片348.66 mg药片含API 21.56±0.98 mg，回收率89.4%。制造商宣称的200 mg片重与实际测量存在显著差异。

【药代动力学】分析6只治疗猫(5 mg/kg剂量)的36份血清/血浆样本。给药4小时后血清药物浓度中位数达稳定水平，但个体差异显著——某个体浓度超群体中位数两倍。血浆与血清数据高度一致，验证方法的可靠性。

该研究首次通过多技术联用策略破解了争议性兽药的化学本质，建立的快速检测方法为非法药物监管树立新标准。发现制造商不仅错误标注API结构，实际片重也与声称存在74%偏差，凸显药品质量管控漏洞。治疗猫体内药物浓度的显著个体差异提示需要个性化给药方案，为后续药代动力学研究奠定基础。从技术层面看，EAD与CID的互补应用为复杂基质中化合物鉴定提供了新思路，而0.15%甲酸改善分离效率的发现对同类分析方法具有普适参考价值。这些发现不仅对兽药监管具有即时应用价值，其技术路线更为分析化学领域解决"结构黑箱"问题提供了范式参考。