基于LC-MS/MS技术的干血斑中内源性大麻素与Δ9-四氢大麻酚及其代谢物同步检测方法的建立与应用

本研究针对内源性大麻素（ECs）和Δ9-THC在血液中稳定性差、浓度低等检测难题，开发了一种基于LC-MS/MS的干血斑（DBS）同步定量方法，实现了AEA、2-AG/1-AG、OEA、PEA与THC及其代谢物的高灵敏度检测（LLOQ低至0.1 μg/L），验证了DBS在ECS研究中的实用价值，为临床和基础研究提供了创新工具。

　　

大麻素研究近年来因医疗应用和社会关注度攀升成为热点，但内源性大麻素系统（ECS）的检测却面临"三低一高"困境——分子浓度低（皮克至纳克级）、稳定性差（如2-AG易异构化为1-AG）、样本量需求低（微升级），且预处理复杂度高。传统血浆检测需复杂离心和低温保存，而Δ9-四氢大麻酚（THC）滥用监测又亟需便捷方法。法国研究人员另辟蹊径，将新生儿筛查中成熟的干血斑（DBS）技术引入ECS研究，通过优化前处理流程，首次实现4种内源性大麻素（AEA、2-AG/1-AG、OEA、PEA）与THC及其代谢物（THC-COOH、11-OH THC）的同步检测。

研究采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术，结合同位素内标法，以20 μL指尖血为样本建立方法。关键突破在于：① 自制EC-free基质解决DBS粘度问题；② 甲醇-乙酸乙酯（7:3）混合溶剂实现高效萃取；③ 色谱梯度优化分离2-AG/1-AG异构体。方法验证显示，所有分析物LLOQ达亚微克级（AEA 0.1 μg/L），稳定性实验证实DBS可有效保护ECs免受降解，为野外采样提供可能。

主要研究结果

1. 化学品与样本制备
   通过对比不同替代基质，最终选用EC-free全血模拟真实样本，解决DBS点样扩散问题。2-AG标准品含10% 1-AG的特性被纳入方法开发考量。

2. 方法验证
   线性范围覆盖生理/药理学浓度（如THC 0.5-50 μg/L），日内/日间精密度＜15%（LLOQ点＜20%）。2-AG在DBS中72小时稳定性达85%，显著优于液态样本。

3. 实际应用
   DBS技术成功克服传统ECS研究的三大瓶颈：微量采样（单点3.2 mm直径）、室温运输可行性、避免血浆制备引发的假性升高（如血小板释放2-AG）。

结论与意义
该研究发表于《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》，首次将DBS技术拓展至ECS全谱分析领域。Jean-Fran?ois Wiart团队开发的"一站式"检测方案，不仅为THC滥用监测提供便捷工具，更开创性地解决了ECs临床研究的样本稳定性难题。特别值得注意的是，2-AG/1-AG比值检测为ECS功能研究提供新维度，而方法中采用的VAMS兼容设计（如HemaXis-DB10）预示着家庭自采样的应用前景。这项技术或将推动大麻素治疗药物监测和成瘾机制研究的范式转变。