基于UPLC-MS/MS技术的甘草-吴茱萸配伍减毒机制研究：CYP3A4调控与肝毒性代谢物检测

本研究针对吴茱萸(EF)肝毒性机制不明及临床配伍甘草减毒的科学依据缺失问题，通过整合UPLC-QQQ-MS/MS和UPLC-Q/TOF-MS/MS多质谱技术，揭示甘草通过抑制CYP3A4介导的吴茱萸碱(EVD)代谢活化实现减毒，其中异甘草素(ILG)的酶抑制参数kinact =0.034 min?1 、KI =0.63 μM，为中药配伍理论提供了代谢互作层面的科学证据。

　　

在全球天然药物使用量激增的背景下，草药性肝损伤(HILI)已占药物性肝损伤(DILI)病例的26.81%。吴茱萸(Evodiae Fructus, EF)作为常用中药，虽具显著疗效，但其主要成分吴茱萸碱(evodiamine, EVD)经CYP3A4代谢活化产生的亚甲基吲哚烯和亚胺醌中间体已被证实会导致肝损伤。临床实践中，EF常与甘草配伍以"增效减毒"，但科学机制尚未阐明。为此，来自中国的研究团队在《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》发表研究，通过多维度技术联用揭示了这一经典药对的减毒奥秘。

研究采用UPLC-QQQ-MS/MS定量分析与UPLC-Q/TOF-MS/MS高分辨质谱技术，结合大鼠血清生化指标监测、肝脏病理学评估及体外酶动力学实验。实验样本包括EF和甘草提取物处理的大鼠模型、人/大鼠肝微粒体(HLMs/RLMs)及重组CYP3A4酶系统。

Licorice protected rats from EF-induced liver injury
研究发现EF单独给药使大鼠ALT/AST水平显著升高(最高达1.6倍，p<0.001)，而1:1配伍甘草后指标显著改善。病理切片显示甘草能有效减轻EF导致的肝细胞坏死和炎性浸润。

Chemicals and materials
实验证实甘草中异甘草素(isoliquiritigenin, ILG)对CYP3A4抑制最强，呈现时间依赖性不可逆抑制，其k_inact
=0.034 min^?1
、K_I
=0.63 μM。通过谷胱甘肽捕获实验，发现ILG可减少62.3%的EVD活性代谢物生成。

Conclusion
研究首次从代谢互作角度阐明：甘草通过ILG抑制CYP3A4，阻断EVD代谢活化途径，从而减轻EF肝毒性。该发现不仅为"甘草调和诸药"的经典理论提供现代科学注解，更为含EF的中药复方(如吴茱萸汤)的临床安全应用提供了剂量优化依据。

这项研究的意义在于：1) 建立中药配伍减毒的代谢调控研究范式；2) 发现ILG作为天然CYP3A4抑制剂的应用潜力；3) 为其他需代谢活化的毒性中药(如黄药子)的配伍研究提供方法学参考。国家自然科学基金(82474177, 82274236)和天津市企业科技特派员项目(23YDTPJC00730)的支持，体现了该研究在中药现代化研究领域的重要价值。