乙酰化组学揭示耳念珠菌氟康唑耐药性演化的关键机制

本研究针对耳念珠菌(Candida auris)多重耐药性临床难题，通过梯度诱导构建氟康唑耐药株(CF2-6)，采用4D非标记蛋白质组学技术系统分析乙酰化修饰(acetylome)在耐药演化中的作用。研究发现CF3(16-32 μg/mL)和CF4(64 μg/mL)为关键耐药转折点，揭示核糖体蛋白乙酰化下调与氧化应激通路激活的阶段性特征，首次绘制该菌组蛋白乙酰化图谱，为真菌耐药机制研究提供新视角。

　　

在真菌感染治疗领域，耳念珠菌(Candida auris)正成为全球公共卫生的重大威胁。这种机会性病原体不仅具有极强的环境适应性，更展现出对多种抗真菌药物（包括临床常用的氟康唑）的耐药性。据统计，超过90%的临床分离株对至少一种抗真菌药耐药，40%对两种以上药物耐药。面对这一"超级真菌"，传统治疗手段日渐失效，但科学家对其耐药机制的理解仍存在重大空白。

针对这一困境，研究人员选择从蛋白质翻译后修饰(Post-translational modifications, PTMs)这一全新视角切入。乙酰化修饰(acetylation)作为真核生物中关键的PTMs类型，已被证实与细菌耐药性相关，但在真菌特别是耳念珠菌中的研究尚属空白。通过梯度浓度诱导法，团队成功构建了氟康唑MIC₅₀
逐步升高的耐药株系(CF1-CF6)，并运用4D非标记定量蛋白质组学技术，系统比较了不同耐药阶段菌株的乙酰化修饰谱差异。

关键技术包括：1）建立梯度耐药模型（从敏感株CF1诱导至最高耐药株CF6）；2）4D label-free定量蛋白质组学（采用timsTOF Pro质谱仪）；3）生物信息学分析（GO、KEGG通路富集）；4）组蛋白乙酰化位点鉴定。

【关键耐药转折点的发现】
通过比较6个菌株18个样本的6310个定量乙酰化位点，发现CF3(16-32 μg/mL)和CF4(64 μg/mL)呈现显著的修饰模式转变。CF3阶段核糖体蛋白乙酰化水平整体下降40%，而CF4阶段新出现572个乙酰化位点，提示存在阶段性适应策略。

【功能通路特异性调控】
CF3阶段上调蛋白主要富集于氧化应激反应（如过氧化氢酶）、解毒系统（GST超家族）和多元醇代谢通路，同时伴随组蛋白H3K9乙酰化水平升高。CF4阶段则显著激活糖酵解/糖异生通路，关键酶如醛缩酮酶(ALDO)出现多位点乙酰化修饰。

【组蛋白修饰图谱】
首次绘制耳念珠菌组蛋白乙酰化全景图，鉴定到H2A、H3、H4等核心组蛋白的12个保守修饰位点，其中H3K27ac变化与耐药性呈正相关，暗示表观遗传调控参与耐药演化。

这项发表于《Journal of Proteome Research》的研究具有多重突破意义：首次建立耳念珠菌乙酰化修饰数据库，发现核糖体功能重编程与代谢通路调整是耐药演化的关键；提出的"两阶段适应模型"为临床耐药预警提供新标志物；组蛋白乙酰化图谱的绘制开辟了表观药物治疗新靶点。该研究不仅深化了对真菌耐药机制的理解，更为发展针对PTMs的精准抗真菌策略奠定理论基础。