基于干血斑技术的18-40岁女性四种性类固醇参考范围建立及其在性发育异常筛查中的应用

本研究通过毛细管干血斑(DBS)采集结合液相色谱-串联质谱(LCMS)技术，首次建立了健康育龄女性全血中睾酮(T)、雄烯二酮(A4)、17α羟孕酮(17OHP)和孕酮(P4)的参考范围，揭示了年龄、避孕药使用和月经周期对性类固醇的影响，为性发育异常(DSD)筛查提供了便捷、精准的解决方案。

　　

在女性健康和运动医学领域，准确评估性类固醇水平对诊断生殖系统疾病和保障体育竞赛公平性至关重要。传统血清检测需静脉穿刺和低温运输，而免疫分析法在低浓度性激素检测中存在特异性不足的问题。针对这些痛点，澳大利亚Monash大学和ANZAC研究所的Yuanyuan Wang、Susan R. Davis、David J. Handelsman团队创新性地采用干血斑(DBS)采样结合液相色谱-串联质谱(LCMS)技术，建立了18-40岁女性四种关键性类固醇的参考范围，相关成果发表于《The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology》。

研究团队采用横断面设计，招募120名健康育龄女性，通过指尖采血获取DBS样本。关键技术包括：1）标准化DBS采集流程；2）人工血液制备质控样本；3）LCMS多分析物检测技术；4）非参数统计处理左删失数据。样本处理采用甲基叔丁基醚(MTBE)萃取，通过Phenyl Hexyl色谱柱分离，Sciex 6500+质谱仪检测，检测限达0.06-0.13 ng/mL。

研究结果部分：

1. 参考范围建立：获得全血性类固醇中位数(95%置信区间)：T 0.75(0.28-2.20)nmol/L、A4 2.69(1.02-6.03)nmol/L、17OHP 1.62(0.32-8.52)nmol/L、P4 0.65(0.18-41.0)nmol/L。
2. 年龄影响：A4随5岁年龄间隔呈渐进性下降(p=0.001)，18-24岁组T显著高于35-40岁组。
3. 避孕药影响：口服避孕药或依托孕烯植入剂使用者所有性类固醇显著降低(p<0.004)。
4. 月经周期：黄体期17OHP和P4显著升高，A4在排卵中期出现小峰值，而T无显著变化。
5. BMI相关性：所有性类固醇与BMI无显著关联。

讨论部分指出，该研究首次建立的DBS-LCMS检测体系具有三大突破：1）为XY性发育异常(如5α还原酶缺乏症、17β羟类固醇脱氢酶缺乏症)筛查提供非侵入性解决方案；2）证实无需血细胞比容校正即可获得可靠数据；3）发现年龄对A4的独特影响模式。研究者特别强调，2.2 nmol/L的T阈值可作为识别男性水平雄激素的临界值，结合SRY基因PCR检测，可构建"性类固醇+遗传标记"的双重筛查体系，这对保障女性体育竞赛公平性具有重要实践价值。

该技术突破传统检测的时空限制，使家庭自采样和大规模流行病学研究成为可能。未来研究需扩大样本量，特别是肥胖和吸烟人群，以完善参考范围。正如作者所述，这项创新不仅为临床诊断提供新工具，更开创了反兴奋剂科学和性别验证检测的新范式。