寨卡病毒重组EDIII蛋白的纯化、重折叠及pH依赖性稳定性研究

为解决寨卡病毒(ZIKV)疫苗开发中重组外结构域III(rEDIII)蛋白功能活性获取难题，研究人员通过优化大肠杆菌表达条件、建立包涵体(IBs)纯化体系及pH梯度重折叠策略，成功在Tris-HCl pH 8.8缓冲液中恢复rEDIII天然构象（经CD光谱验证），其体外竞争性病毒抑制实验显示29 μg的半数抑制剂量(ID50 )，该方案为黄病毒属蛋白的诊疗开发提供普适性技术路径。

　　

随着全球气温攀升，蚊媒传播的寨卡病毒(ZIKV)威胁日益加剧。尽管病媒控制是主要防控手段，但研发经济高效的疫苗对中低收入国家尤为重要。本研究创新性地利用大肠杆菌表达系统制备ZIKV重组外结构域III(rEDIII)，通过温度与培养基优化提升表达效率。由于大部分目标蛋白以包涵体(IBs)形式存在，团队开发了系统性提取方案，并首次揭示缓冲液pH环境与rEDIII重折叠效率的关联性——Tris-HCl pH 8.8缓冲液经圆二色谱(CD)证实能有效恢复蛋白天然构象。更令人振奋的是，重折叠后的rEDIII在体外竞争中展现出阻断病毒入侵宿主细胞的能力，其半数抑制剂量(ID₅₀
)仅为29微克。这项技术突破不仅适用于ZIKV防治，更为黄病毒属其他成员（如登革热、西尼罗病毒）的蛋白处理提供了标准化范本，加速了抗病毒诊断试剂与治疗药物的开发进程。