猪A群轮状病毒G9P[23]和G12P[7]毒株的垂直传播可能性及其分离研究

本研究针对猪A群轮状病毒（PoRVA）垂直传播机制这一未解难题，通过采集仔猪睾丸、脐带血和初乳样本，结合qRT-PCR、免疫组化和病毒分离技术，首次证实PoRVA可突破胎盘屏障垂直传播。分离的G9P[23]和G12P[7]毒株具有人-猪重组特征，MA-104细胞培养和仔猪攻毒实验验证其强致病性。该发现为猪轮状病毒防控策略提供了关键理论依据，对公共卫生安全具有重要意义。

　　

猪轮状病毒（Porcine rotavirus A, PoRVA）是引发仔猪腹泻的主要病原体，每年给全球养猪业造成巨大经济损失。尽管粪-口传播途径已被广泛认知，但临床上1-3日龄哺乳仔猪的腹泻病例提示可能存在垂直传播。这一科学假设长期缺乏直接证据，成为制约PoRVA精准防控的关键瓶颈。

德州学院联合多家机构的研究团队在《Porcine Health Management》发表重要成果。研究人员从浙江和山东两个PoRVA阳性猪场采集60组新生仔猪睾丸、脐带血及初乳样本，采用qRT-PCR检测发现阳性率分别高达70.00%、55.00%和73.33%。免疫组化首次在睾丸结缔组织和附睾管上皮细胞中观察到PoRVA抗原，从睾丸组织成功分离出两株新型毒株QT2023（G9P[23]）和BH2023（G12P[7]）。全基因组测序显示二者具有Wa-like骨架，但VP1、VP7等基因与人源毒株高度同源，提示存在跨物种重组。MA-104细胞培养证实毒株可稳定传代（QT2023滴度达10^7.0
TCID₅₀
/mL），攻毒实验显示接种后12小时即出现腹泻症状，小肠绒毛萎缩等典型病变。

关键技术包括：

1. 多部位样本采集（睾丸/脐带血/初乳）
2. 高灵敏度qRT-PCR定量（检测限6.55拷贝/μL）
3. 免疫组化定位病毒抗原
4. MA-104细胞系病毒分离培养
5. 仔猪攻毒病理模型建立

主要研究发现：
Detection of PoRVA in reproduction-related samples
通过标准曲线验证的qRT-PCR技术，在生殖相关样本中检出高病毒载量，排除PEDV等混合感染可能。

Immunohistochemical assay
睾丸组织切片中观察到病毒抗原特异性沉积，首次提供PoRVA突破血-睾屏障的形态学证据。

Genotype constellation analysis
QT2023（G9-P[23]-I5-R1-C1-M1-A8-N1-T1-E1-H1）和BH2023（G12-P[7]-I5-R1-C1-M1-A8-N1-T1-E1-H1）的基因型分析揭示其与人源毒株的重组特征，VP7基因分别与中国猪源LB106株（96.8%）和阿根廷人源Arg720株（97.6%）高度同源。

Isolation of the emerging PoRVA strains
成功获得P13代稳定传代毒株，免疫荧光证实病毒蛋白表达，为后续研究提供标准毒种。

Pathogenicity experiments
攻毒组36小时粪便排毒达峰，小肠病理显示绒毛上皮脱落，免疫组化证实病毒在肠道的复制。

该研究首次确证PoRVA可经胎盘垂直传播，分离的G9P[23]/G12P[7]毒株具有人畜共患潜力。发现解释临床早发性腹泻的发病机制，为优化母猪免疫程序提供理论依据。基因组分析揭示的跨物种传播风险，对公共卫生安全预警具有重要意义。研究建立的垂直传播模型为其他动物病毒研究提供了方法学参考。