基于流式病毒颗粒计数技术的SARS-CoV-2病毒样颗粒单颗粒定量研究

为解决SARS-CoV-2病毒样颗粒(VLPs)高效制备与定量分析的难题，研究人员通过四质粒与双质粒系统对比，成功构建了携带EGFP标签的荧光VLPs，并利用流式病毒颗粒计数技术(Flow virometry)实现单颗粒水平分析。结果显示，双质粒系统使核衣壳蛋白(N)产量提升4倍(800 ng/mL)，VLPs平均粒径80 nm、浓度达1.68×108 颗粒/mL，为疫苗开发与病毒入侵机制研究提供新工具。

　　

科研团队通过基因工程手段，将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)分别融合至SARS-CoV-2刺突蛋白(S)的C端和核衣壳蛋白(N)的N/C端，在HEK 293T细胞中成功组装出具有感染活性的荧光病毒样颗粒(VLPs)。Western blot实验证实了携带3xHA标签的S/N蛋白在VLPs中的共定位。创新性采用内部核糖体进入位点(IRES)元件构建的双质粒系统，使VLPs的N蛋白产量飙升至800 ng/mL，较传统四质粒方案提升4倍。流式病毒颗粒计数技术精准捕捉到这些直径约80 nm的微小颗粒，测得浓度高达1.68×10⁸
颗粒/mL。这些荧光VLPs不仅能高效侵染表达hACE2受体的A549细胞，其优化制备方案更为疫苗研发和病毒入侵机制研究提供了标准化工具。该研究首次证明双质粒系统的优越性，同时确立了流式病毒颗粒计数技术在纳米级生物颗粒定量分析中的标杆地位。