miR-23b-3p通过抑制Pyk2/Src信号通路调控肝癌干细胞功能及肝癌进展的机制研究

肝癌（HCC）的高复发和转移与肝癌干细胞（LCSCs）的干性维持密切相关，但Pyk2/Src通路在其中的作用机制尚不明确。上海交通大学医学院附属仁济医院团队通过构建Pyk2敲除的LCSCs模型，结合miR-23b-3p干预实验，发现miR-23b-3p通过靶向抑制Pyk2/Src信号通路，显著降低LCSCs的增殖、迁移和化疗抵抗能力。该研究为靶向LCSCs的肝癌治疗提供了新策略，成果发表于《Cancer Cell International》。

　　

肝癌是全球癌症相关死亡的第二大原因，尽管诊疗技术不断进步，但术后5年复发率仍高达50%-60%。这一临床困境的根源在于肝癌干细胞（LCSCs）的存在——这群具有自我更新和多向分化潜能的细胞，是肿瘤复发、转移和化疗抵抗的"罪魁祸首"。然而，调控LCSCs干性的关键分子机制尚未完全阐明。

上海交通大学医学院附属仁济医院的研究团队将目光聚焦于富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（Pyk2）。既往研究发现，Pyk2在肝癌组织中高表达且与不良预后相关，但其在LCSCs中的作用仍是未解之谜。与此同时，microRNA-23b-3p（miR-23b-3p）被报道可通过靶向Pyk2抑制肿瘤进展，但该调控网络在LCSCs中的生物学意义亟待验证。

研究人员采用肝癌细胞系HepG2和HCCLM3，通过无血清悬浮培养法富集LCSCs，并利用流式细胞术检测干性标志物CD133和EPCAM的表达进行验证。通过siRNA转染构建Pyk2敲除的LCSCs模型，结合miR-23b-3p模拟物/抑制剂的共转染，采用CCK-8、Transwell、肿瘤球形成等实验评估细胞功能。通过qPCR和Western blot分析干性基因和信号通路蛋白表达，并建立BALB/c裸鼠移植瘤模型进行体内验证。

研究结果显示，LCSCs中Pyk2表达显著高于普通肝癌细胞。Pyk2敲除后，LCSCs的增殖、迁移和侵袭能力明显受抑，肿瘤球形成减少，对顺铂的敏感性增强。机制上，Pyk2敲除下调了干性相关基因（Nanog、Oct4、Sox2等）的表达。双荧光素酶报告基因实验证实，miR-23b-3p可直接结合Pyk2的3'-UTR抑制其表达。在Pyk2敲除的LCSCs中，抑制miR-23b-3p可恢复Pyk2/Src信号通路活性，逆转Pyk2敲除的抑癌效应。动物实验进一步显示，miR-23b-3p抑制组肿瘤体积和重量显著增加，且Pyk2/Src表达水平与肿瘤恶性程度呈正相关。

这项研究首次揭示了miR-23b-3p/Pyk2/Src轴在调控LCSCs干性中的核心作用：miR-23b-3p通过靶向抑制Pyk2表达，进而阻断Src信号通路的激活，最终削弱LCSCs的恶性生物学行为。该发现不仅为理解肝癌复发转移的分子机制提供了新视角，更提示通过恢复miR-23b-3p表达或靶向Pyk2/Src通路可能成为改善肝癌治疗的新策略。值得注意的是，研究团队发现高度转移性的HCCLM3细胞中miR-23b-3p表达显著降低，这为筛选侵袭性肝癌亚型和开发个体化治疗方案提供了潜在分子标志物。

未来研究需进一步探索：①在患者来源异种移植（PDX）模型中验证该通路的临床相关性；②开发基于miRNA的靶向递送系统；③阐明Pyk2/Src下游效应分子的具体作用机制。这些工作将推动该研究成果向临床转化，为攻克肝癌治疗难题带来新希望。