靶向发热伴血小板减少综合征病毒核蛋白抗体的开发与诊断应用研究

这篇研究通过噬菌体展示技术成功筛选出靶向发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）核蛋白（NP）的单链抗体片段（scFv），并进一步开发了人源和鼠源单克隆抗体。研究证实了抗体对SFTSV NP的高亲和力和特异性，通过夹心ELISA筛选出高效抗体配对（如mP01A05/hP01C09），为SFTSV的早期诊断提供了重要工具。该成果为开发快速诊断试剂盒奠定了坚实基础，对控制这种致死率高达30%的烈性传染病具有重要意义。

　　

发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）的诊断挑战
SFTSV是一种由新型班达病毒（Bandavirus）引起的烈性传染病，通过蜱虫叮咬传播，可导致高热、血小板减少和多器官功能障碍，病死率高达30%。由于缺乏特效治疗手段，早期诊断成为防控关键。病毒核蛋白（NP）因其高度保守性和丰度优势，成为诊断标志物的理想靶标。

重组NP表达与抗体筛选
研究团队从韩国分离株KAJNH2（基因型B-3）中克隆NP基因，通过哺乳动物细胞表达系统获得C端带6×His标签的重组蛋白（分子量27.8 kDa）。采用合成scFv噬菌体文库进行三轮生物淘选，从600个克隆中筛选出20个初始结合体。通过剂量依赖性ELISA验证，最终获得10个特异性结合NP的scFv克隆，其中P01A05等抗体对B-3和B-2亚型（仅存在I230V单氨基酸差异）均表现出强结合力。

双物种抗体的功能验证
将筛选到的scFv序列分别构建到人源和鼠源IgG表达载体中，在ExpiCHO细胞中表达并纯化出5种人源IgG和6种嵌合鼠源IgG。生物层干涉实验显示，人源P01A05的K_d
值（0.22 nM）比鼠源低10倍，但两者均达到纳摩尔级亲和力。值得注意的是，P04D08克隆对B-2亚型的结合活性显著降低，提示230位氨基酸可能参与表位形成。

诊断应用潜力评估
通过夹心ELISA筛选出三组高效抗体配对：mP01A05/hP01C09、mP01A05/hP01B10和mP02E04/hP01A05，其检测限达3.4-5.5 μg/mL。这些抗体对同属Phenuiviridae科的裂谷热病毒（RVFV）和汉坦病毒（HTNV）的NP均无交叉反应，展现出优异特异性。研究还建立了基于哺乳细胞表达系统的重组NP制备流程，克服了BSL-3病原体的操作限制。

技术优势与临床转化前景
相较于传统杂交瘤技术，噬菌体展示技术大幅缩短了抗体开发周期，且无需动物免疫。该研究建立的诊断平台可检测急性期患者血液中的病毒NP抗原，弥补qRT-PCR对设备要求的局限性。未来需在临床样本中验证其灵敏度，并探索与量子点标记等纳米技术结合，进一步提升检测性能。这些抗体资源为开发床边快速检测试剂盒提供了核心材料，对SFTS的早期干预和传播阻断具有重要价值。