基于巢式PCR的α-微管蛋白基因扩增技术用于新鲜与FFPE组织中Paracoccidioides spp.的精准鉴定

来自拉丁美洲的研究人员针对副球孢子菌病诊断难题，开发了一种基于巢式PCR的α-微管蛋白基因扩增技术。该方法可特异性识别5种Paracoccidioides spp.（包括P. brasiliensis sensu stricto、P. americana等），在新鲜组织和FFPE样本中均实现检测，但发现福尔马林固定会导致G>T等碱基突变干扰RFLP分析，为深部真菌病的分子诊断提供了新工具。

　　

副球孢子菌病作为拉丁美洲重要的深部真菌病，其病原体已依据遗传差异被重新划分为5个物种。研究者创新性地采用巢式PCR(nested PCR)技术靶向α-微管蛋白基因片段，成功从实验感染动物的新鲜组织和福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本中扩增出Paracoccidioides spp.的特异性序列。该技术展现出卓越的特异性，可区分P. brasiliensis sensu stricto、P. americana等5个菌种，且不与毛霉(Mucor fragilis)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)等常见病原体发生交叉反应。

值得注意的是，虽然新鲜组织扩增产物能完美适配传统限制性片段长度多态性(RFLP)分析，但FFPE样本却因福尔马林固定导致G>T/T>G等碱基突变"幽灵峰"，这些人为假象严重干扰了酶切位点识别。DNA测序揭示这些突变呈现双向转换特征（如A>T/T>A），犹如在遗传密码上留下了"福尔马林指纹"。该研究为临床标本的分子诊断提供了双轨解决方案，同时也警示FFPE样本在精准分型中可能存在的"分子陷阱"。