基于CRISPR-Cas12b的一锅法SIMPLE技术：突破PAM限制实现单核苷酸变异快速检测及临床转化应用

为解决CRISPR检测中PAM序列限制及单核苷酸变异(SNV)快速识别难题，研究人员开发了新型PAM筛选技术及一锅法CRISPR检测系统"SIMPLE"。该方法将检测范围扩展至非经典PAM(如ATN)，可在30分钟内完成SNV检测，对耐药菌(灵敏度10拷贝/反应)和癌症低频突变(1%突变率)的临床样本检测与测序结果100%一致，为分子诊断提供了高特异性、广适用性的新工具。

　　

在分子诊断领域，快速精准的核酸检测技术至关重要。基于规律间隔成簇短回文重复序列(CRISPR)的系统正成为新一代检测工具，但其应用受限于原间隔相邻基序(PAM)的序列要求，且难以实现单核苷酸变异(SNV)的快速"一锅法"检测。

研究者们突破性地开发了PAM序列筛选技术，显著拓展了CRISPR的检测范围。更令人瞩目的是，他们创新性地建立了名为"SIMPLE"的一锅法检测体系——仅需30分钟即可完成SNV鉴定。在临床验证中，该系统对典型PAM(TTN)介导的耐药菌检测灵敏度达10拷贝/反应，与二代测序结果完全吻合；更在非典型PAM(ATN)介导的高背景干扰下，成功检出癌症热点突变中低至1%的突变频率。

这项技术不仅突破了CRISPR的PAM限制瓶颈，更通过其"一锅法"设计实现了SNV的高通量快速检测，为感染性疾病精准用药和肿瘤早诊提供了革命性的分子诊断方案。