Burkholderia pseudomallei（类鼻疽伯克霍尔德菌）治疗期间头孢他啶耐药性出现的临床、表型与基因组特征：配对分离株的深度解析

本研究针对类鼻疽伯克霍尔德菌（B. pseudomallei）在头孢他啶（CAZ）治疗期间出现耐药性的临床难题，通过分析配对分离株SCBP001（治疗前）与SCBP007（治疗后23天），发现G(-78)A启动子突变导致penA基因过表达，介导β-内酰胺类耐药。研究揭示了耐药性动态演变机制，强调分子监测对优化抗生素治疗的关键意义，为耐药菌感染防控提供新见解。

　　

在东南亚和澳大利亚北部，一种名为类鼻疽的疾病长期威胁着人类健康，其病原体类鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei）能通过伤口、呼吸道或消化道入侵人体，导致从无症状感染到致命败血症的多种临床表现。头孢他啶（CAZ）是治疗类鼻疽的一线药物，但近年来，这种“土壤杀手”在治疗过程中逐渐演化出耐药性，成为临床棘手难题。更令人担忧的是，耐药机制尚未完全阐明，且传统药敏检测方法可能存在偏差。

针对这一挑战，来自朱拉隆功大学医学院的研究团队在《Journal of Global Antimicrobial Resistance》发表了一项突破性研究。他们追踪了一名12岁泰国男孩的类鼻疽尿路感染病例，在CAZ治疗23天后发现病原体对CAZ和碳青霉烯类药物敏感性下降。通过对比治疗前后的配对菌株（SCBP001与SCBP007），团队首次在亚洲ST99型菌株中鉴定出G(-78)A启动子突变，该突变通过上调penA基因表达介导耐药，为临床耐药监测提供了分子标志物。

关键技术方法
研究采用临床分离株SCBP001（治疗前）和SCBP007（治疗后），通过Etest和肉汤微量稀释法（BMD）检测CAZ、美罗培南（MEM）和亚胺培南（IPM）的最小抑菌浓度（MIC）；全基因组测序（WGS）结合牛津纳米孔与Illumina双平台完成基因组组装；多基因座序列分型（MLST）分析菌株亲缘性；Ashdown琼脂观察菌落形态；生物信息学工具（Abricate、FastANI）预测耐药基因并构建系统发育树。

研究结果

3.1 临床特征
患者因急性肾盂肾炎就诊，尿培养检出B. pseudomallei（>10⁵
CFU/ml）。初始CAZ治疗有效，但23天后出现复发，SCBP007对CAZ的MIC从1 μg/mL升至32 μg/mL（BMD），MEM MIC从1 μg/mL升至2 μg/mL，提示交叉耐药风险。

3.5 基因组特性
两株菌基因组均为7.16 Mb，含两条染色体，GC含量68.15%。MLST证实均为ST99型，排除了新发感染可能。

3.8 耐药机制解析
WGS发现SCBP007在penA基因上游存在G(-78)A突变，该位点可形成组成型启动子，导致β-内酰胺酶过表达。值得注意的是，两株菌均携带I139M和T147A氨基酸替换，但仅G(-78)A突变与耐药表型共现。

3.7 进化分析
系统发育显示SCBP001/007与泰国高毒力株HBPUB10303a（ANI 99.7%）同源，提示区域性耐药进化路径。

结论与意义
这项研究首次报道了亚洲ST99型B. pseudomallei通过penA启动子突变获得CAZ耐药性的完整证据链。其重要意义在于：

1. 临床实践：揭示了Etest可能低估耐药风险，推荐BMD作为确认方法；
2. 耐药监测：G(-78)A突变可作为分子标记用于早期预警；
3. 进化认知：证明相同突变在不同遗传背景下（如澳大利亚ST880与泰国ST99）可独立进化，凸显耐药机制的复杂性。

该成果为类鼻疽的精准治疗和耐药防控提供了关键科学依据，尤其对东南亚 endemic地区的临床实践具有直接指导价值。未来需扩大样本验证该突变的流行病学意义，并探索针对penA过表达的新型抑制剂。