实时多重交叉置换扩增技术(MCDA)在A组链球菌快速高灵敏检测中的创新应用

为解决A组链球菌(GAS)快速检测难题，研究人员开发了基于实时荧光多重交叉置换扩增(MCDA)的新方法。通过靶向speB基因设计10种引物，结合限制性内切酶识别序列与荧光标记，实现在63℃下40分钟完成检测，灵敏度达50飞克(fg)，且无交叉反应。该技术为GAS诊断提供了高效可靠的新工具。

　　

这项研究开创性地将多重交叉置换扩增技术(Multiple Cross Displacement Amplification, MCDA)与实时荧光检测相结合，为A组链球菌(Group A Streptococcus, GAS)的检测带来突破。科研团队巧妙设计10条靶向毒力因子speB基因的特异性引物，其中核心引物经过精心改造——嵌入限制性内切酶识别位点，并标记荧光基团(Fluorophore)与淬灭基团(Quencher)，构建出"分子开关"系统。

通过系统优化，最终确立63℃为最佳反应温度，仅需40分钟即可完成检测。当遇到GAS基因组DNA时，MCDA反应会产生级联扩增效应，内切酶切割释放荧光信号，实现实时监测。实验数据显示该方法灵敏度惊人，最低可检测到50飞克(fg)级的微量DNA，相当于单个细菌的基因组拷贝数。特异性验证环节更是令人印象深刻——3株GAS菌株全部检出，而29种非GAS病原体均无假阳性，包括其他链球菌属细菌。

在56例临床样本的实战检验中，该技术的表现媲美传统侧流层析试纸条(Lateral Flow Biosensors, LFB)和PCR方法，但速度更快、操作更简便。这项研究将恒温扩增技术的便捷性与实时荧光检测的精准性完美融合，为基层医疗机构提供了堪比实验室标准的诊断利器，尤其适合突发感染疫情的现场筛查。