家族性地中海热未解之谜：MEFV基因p.R202Q变异体在炎症触发中的潜在致病机制研究

《Journal of Clinical Immunology》：Unresolved Issues in Familial Mediterranean Fever: Is p.R202Q MEFV Variant Potentially Pathogenetic in Unleashing Inflammation?

这篇研究通过功能性实验和细胞学评估，探讨了MEFV基因p.R202Q变异体（c.605G>A）在家族性地中海热（FMF）中的临床意义。研究发现，p.R202Q变异体虽未显著影响pyrin蛋白功能，但携带者表现出与FMF患者相似的细胞学异常（如中性粒细胞核异常和左移现象），提示其可能通过非经典途径参与炎症进展。研究创新性地结合PKN1/2抑制剂（UCN-01）刺激实验和细胞形态学分析，为FMF诊断中“意义未明变异”（VUS）的临床解读提供了新依据。

　　

摘要

家族性地中海热（FMF）是一种由MEFV基因突变引发的自身炎症性疾病，其特征为反复发热和浆膜炎。尽管基因检测常用于诊断，但MEFV基因中“意义未明变异”（VUS）的临床解读仍具挑战性。本研究聚焦于p.R202Q（c.605G>A）变异体，通过功能性实验和细胞学分析，探讨其潜在致病机制。结果显示，p.R202Q变异体虽未显著改变pyrin蛋白功能，但携带者表现出与FMF患者相似的细胞学异常，提示其可能通过非经典途径参与炎症进展。

引言

FMF是最常见的遗传性自身炎症性疾病，临床表现为反复发热和浆膜炎，主要由MEFV基因突变导致。MEFV编码的pyrin蛋白是炎症小体的重要调节因子，可检测Rho-GTPase活性。FMF患者因IL-1β过度分泌而出现不可控的炎症反应。尽管基因检测可辅助诊断，但约30%的临床确诊患者缺乏明确的遗传学证据。p.R202Q变异体在人群中的等位基因频率高达23%，但其临床意义尚存争议。本研究旨在通过功能性实验和细胞学评估，阐明p.R202Q变异体在FMF中的潜在作用。

方法

研究纳入4例FMF患者、18例p.R202Q携带者和8例FMF样患者，均来自帕多瓦大学医院自身炎症性疾病门诊。通过密度梯度离心法分离外周血单核细胞（PBMCs），并利用其粘附特性富集单核细胞。单核细胞经LPS（10 ng/mL）预处理3小时后，加入PKN1/2抑制剂UCN-01（12.5 μM）刺激1.5小时。部分实验预先用秋水仙碱（1 μM）处理以评估其抗炎效果。细胞因子（IL-1β、IL-18、IL-1α）水平通过ELISA检测，白细胞形态学通过May-Grünwald-Giemsa（MGG）染色评估。

结果

临床特征与细胞因子水平
p.R202Q携带者的临床表现与典型FMF相似，包括复发性发热（1-2天）、浆膜炎（44%）和关节痛（50%）。血浆IL-1β水平在FMF和FMF样患者中显著高于p.R202Q携带者，而IL-18水平仅在FMF患者中显著升高。

炎症小体激活实验
UCN-01刺激后，FMF患者单核细胞释放的IL-1β和IL-18水平显著高于健康供体（HDs）和p.R202Q携带者。值得注意的是，3例p.R202Q携带者表现出异常高的IL-1β释放（>600 pg/mL），后续基因检测发现其同时携带IFIH1、MVK或TNFRSF1A基因的VUS。

秋水仙碱的抑制作用
秋水仙碱预处理可显著抑制FMF患者单核细胞中UCN-01诱导的IL-1β和IL-18释放，但对p.R202Q携带者和HDs无明显影响。

白细胞形态学异常
p.R202Q携带者和FMF患者的中性粒细胞（N）均表现出高比例的高分叶核和杆状核细胞，提示慢性低度炎症状态。此外，FMF和p.R202Q患者的N核异常（如微核和双核细胞）发生率显著高于HDs。

讨论

p.R202Q变异体未显著干扰pyrin蛋白的二级调控机制（微管动力学依赖性激活），但其携带者表现出与FMF患者相似的细胞学异常。中性粒细胞的高分叶核和核异常可能反映慢性炎症状态，而IL-1β释放增加提示非经典炎症小体激活途径的存在。研究局限性包括样本量较小和未评估HDs中p.R202Q的携带情况。未来需扩大队列并探索p.R202Q与其他基因变异的协同效应。

结论

p.R202Q变异体可能通过非pyrin依赖性途径参与FMF样炎症的进展。结合功能性实验和细胞学分析有助于鉴别VUS的临床意义，优化FMF的诊断和治疗策略。