弓形虫急性感染期诱导脑内寄生虫周围局部髓系细胞免疫反应的机制研究

这篇研究揭示了弓形虫(Toxoplasma gondii)急性感染期如何特异性驱动脑内寄生虫周围的局部髓系免疫反应。通过CCR2RFP/+ 转基因小鼠模型，发现CCR2+ 单核细胞、IBA1+ 髓系细胞和CD68+ 吞噬溶酶体激活信号在寄生虫周围显著富集，且该反应依赖寄生虫复制活性而非效应蛋白GRA15介导的NF-κB通路。研究为中枢神经系统(CNS)感染早期的免疫识别机制提供了新见解。

　　

髓系细胞在脑内的局部免疫应答与弓形虫定位高度相关
通过CCR2^RFP/+
小鼠模型结合荧光标记技术，研究发现急性感染15天后，脑内寄生虫周围100 μm范围内CCR2⁺
单核细胞浸润面积增加35倍，CD68⁺
吞噬溶酶体激活信号提升50%，且63.7%的NF-κB p65信号与CCR2⁺
细胞共定位。值得注意的是，这种反应具有显著的空间特异性——在距离寄生虫1,500 μm以外的脑区几乎检测不到免疫激活信号。

寄生虫-宿主细胞互作驱动免疫细胞募集
利用toxofilin-Cre/Ai6双标记系统，研究首次量化显示：含有≥3个寄生虫互作细胞的视野中，90%同时存在活体寄生虫。这些互作细胞（包括感染细胞、效应蛋白注入细胞等）周围CCR2⁺
细胞密度是低互作区域的3.2倍，提示寄生虫通过直接细胞接触扩大免疫应答范围。

CCL2-NF-κB轴激活不依赖GRA15效应蛋白
虽然CCL2-RFP报告小鼠显示寄生虫周围CCL2表达量增加4.8倍，且63.7%的NF-κB信号与CCR2⁺
细胞共定位，但GRA15基因敲除寄生虫株（Δgra15）感染后，这些指标与野生型株无显著差异。体外实验证实Δgra15寄生虫确实丧失诱导IL-1β分泌的能力，说明脑内NF-κB激活主要来自宿主细胞对寄生虫PAMPs/DAMPs的识别而非GRA15介导的感染细胞内信号传导。

寄生虫复制活性是免疫招募的关键决定因素
比较研究揭示：速殖子（tachyzoites）周围CCR2⁺
细胞密度是包囊（cysts）区域的6.5倍。颅内注射实验进一步证实，仅活体复制型寄生虫能诱导CCR2⁺
细胞脑内募集——200个活体寄生虫注射7天后，脑内CD45^hi
CD11b⁺
Ly6C^hi
炎性单核细胞数量增加12倍，而等量UV灭活或热杀死寄生虫均无此效应。即使将灭活寄生虫剂量提高50倍（10⁴
个），仍无法触发显著免疫应答。

研究启示与转化价值
该工作阐明脑内抗弓形虫免疫具有"精准定位"特性，其强度与寄生虫复制活性正相关。发现CD68⁺
吞噬溶酶体标记可作为评估抗寄生虫活性的生物标志物，而针对寄生虫复制周期的干预策略可能比阻断特定效应蛋白（如GRA15）更具治疗潜力。这些发现为理解神经感染微环境调控提供了新范式。