复方丹参凝胶中五种活性成分的多通道HPLC同步检测方法建立与质量评价研究

本研究针对中药复方凝胶制剂质量控制的难点，建立了同时测定复方丹参凝胶(CSG)中两种酚酸(没食子酸、丹酚酸B)和三种醌类(隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA)的多通道高效液相色谱(HPLC)方法。通过梯度洗脱优化，该方法在70分钟内实现基线分离，验证显示优异线性(R2 0.999)、精密度(RSD<2%)和回收率(98.93-101.31%)，为中药凝胶制剂的标准化提供了关键技术支撑。

　　

在临床实践中，伤口愈合是一个充满挑战的复杂过程，涉及止血、炎症、增殖和组织重塑四个阶段。患者常面临感染、创面不愈、病理性瘢痕等问题，不仅增加医疗负担，更严重影响生活质量。传统中药在促进伤口愈合方面展现出独特优势，其中复方丹参凝胶(CSG)结合丹参、五倍子等药材的活性成分，通过调节TGF-β/SMAD等信号通路发挥多重治疗作用。然而，这类中药凝胶制剂面临关键质量难题——高分子凝胶网络会阻碍有效成分提取，且多组分同步检测技术尚不完善。

针对这一瓶颈，南京中医药大学的研究团队在《Chinese Journal of Analytical Chemistry》发表重要成果。他们创新性地采用氯化钠溶液破坏凝胶离子网络结构，结合多波长检测策略，首次建立了同时测定CSG中五种活性成分（酚酸类和醌类）的高效液相色谱方法。这项研究不仅解决了中药凝胶质量控制的技术难题，更为相关药理研究提供了标准化工具。

关键技术方法包括：1) 采用Waters Symmetry C18色谱柱(250×4.6 mm, 5 μm)进行分离；2) 优化乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱程序(0-70 min, 2-90%乙腈)；3) 多通道检测(没食子酸273 nm、丹酚酸B 286 nm、三种丹参酮270 nm)；4) 通过阴性对照实验验证方法特异性；5) 对三批市售样品进行含量测定验证方法稳定性。

【3.1 检测成分优化】
研究基于丹参和五倍子的临床协同效应，选择其标志性成分：五倍子中的没食子酸（水解单宁的稳定产物），以及丹参中具有促血管生成和抗瘢痕作用的丹酚酸B、隐丹参酮等。这些成分通过清除ROS、抑制TGF-β/SMAD通路等机制发挥治疗作用。

【3.2 样品前处理优化】
突破性地发现20 mL 100%甲醇配合10 g样品量可最大化提取效率。关键创新是采用10% NaCl溶液破坏羧酸交联的凝胶网络，解决高分子基质对活性成分的"包裹效应"。

【3.3 HPLC条件优化】
对比三种色谱柱和流动相组合，最终确定乙腈-0.1%磷酸水系统在35°C柱温下可获得最佳峰形。多波长检测策略克服了不同结构化合物紫外吸收差异大的难题。

【3.4 方法验证】
如图2所示，目标化合物与杂质峰完全分离，阴性对照无干扰。线性范围覆盖三个数量级（如丹参酮IIA 0.0025-0.05 μg），LOD低至0.1 μg/mL。精密度RSD<0.85%，24小时内稳定性RSD<1.93%，加标回收率98.93-101.31%，满足药典要求。

【3.5 样品分析】
三批样品测定显示：丹酚酸B含量最高(3381-3587 μg/g)，显著高于脂溶性丹参酮类(12-83 μg/g)，批间差异<5%，证实工艺稳定性。

这项研究开创性地解决了中药凝胶"提取难、检测难"的双重困境。通过离子干扰提取和多波长HPLC联用，首次实现CSG中水/脂溶性成分的同步定量。虽然当前标记物未涵盖配方中积雪草和白及成分，但为中药凝胶的标准化树立了新范式。从转化医学角度看，该方法可精准监控药物释放动力学，为后续研究凝胶制剂"剂型-成分-疗效"关系奠定基础。值得注意的是，35°C的温和柱温条件有利于节约工业质检能耗，而NaCl辅助提取方案更易实现技术转移。这些突破不仅推动中药凝胶质量控制进入"多组分时代"，更为开发基于药理活性的"智能质控"策略提供了关键技术平台。