基于UPLC-HRMS与实验验证探究飞燕宁方及其提取物芹菜素靶向IGF1R-PI3K-Akt通路逆转EGFR-TKIs耐药的机制

【编辑推荐】本研究针对非小细胞肺癌(NSCLC)患者对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)产生耐药的关键临床问题，通过整合网络药理学、超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-HRMS)和动物实验，首次揭示传统中药复方飞燕宁(FYN)及其活性成分芹菜素通过抑制IGF1R-PI3K-Akt信号通路逆转奥希替尼耐药的作用机制，为克服靶向治疗耐药提供了创新性解决方案。

　　

肺癌是全球癌症死亡的首要原因，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占比高达85%。尽管针对EGFR突变的三代靶向药奥希替尼(osimertinib)显著延长了患者生存期，但耐药问题如同悬在头顶的达摩克利斯之剑——约50%患者会在10-14个月内出现耐药，且半数耐药机制尚未明确。面对这一临床困境，上海中医药大学附属龙华医院的研究团队将目光投向了临床应用20余年的传统中药复方飞燕宁(FYN)，通过多学科交叉研究揭示了其逆转耐药的分子机制，相关成果发表在《Journal of Ethnopharmacology》。

研究团队采用"干湿结合"的创新策略：首先通过UPLC-HRMS锁定FYN入血成分芹菜素(apigenin)等活性物质；运用网络药理学构建"中药-成分-靶点-通路"多维网络；结合细胞实验证实FYN可抑制H1975OR耐药细胞的增殖、迁移侵袭并诱导凋亡；最后通过裸鼠移植瘤模型验证其体内抑瘤效果。Western blot等分子生物学手段揭示了IGF1R-PI3K-Akt这一关键耐药相关通路的作用机制。

【FYN抑制EGFR-TKIs耐药NSCLC细胞的生长表型】
剂量依赖性实验显示500 μg/ml FYN能显著抑制H1975OR细胞的增殖(抑制率提升37.2%)、迁移(减少51.8%)和侵袭能力(降低63.4%)，与奥希替尼联用产生协同效应。流式细胞术证实其通过阻滞G₀
/G₁
期细胞周期和激活caspase-3促凋亡。

【网络药理学解析多靶点作用机制】
构建的PPI蛋白互作网络识别出EGFR、IGF1R、AKT1等核心靶点。KEGG富集分析显著富集到PI3K-Akt通路(P<0.001)，分子对接显示芹菜素与IGF1R激酶域结合能达-8.9 kcal/mol。

【动物实验验证体内疗效】
裸鼠移植瘤实验表明FYN组肿瘤体积较对照组缩小62.3%，Western blot显示瘤组织p-IGF1R、p-Akt表达量分别下降71%和58%，证实其通过阻断IGF1R-PI3K-Akt通路克服耐药。

这项研究首次系统阐释了中药复方FYN多成分、多靶点对抗EGFR-TKIs耐药的作用模式：以芹菜素为代表的活性成分通过靶向抑制IGF1R受体磷酸化，进而阻断下游PI3K-Akt信号通路的异常激活，最终逆转肿瘤细胞的耐药表型。该发现不仅为临床解决靶向治疗耐药提供了新策略，更通过现代科学技术揭示了传统中药"益气养精、解毒散结"治疗理念的科学内涵。研究建立的"化学成分解析-网络靶标预测-实验验证"研究范式，为其他中药复方的机制研究提供了重要参考。