基于CHO-K1-huCD39-10B6细胞模型的抗CD39抗体生物活性检测新方法的建立与验证

为解决抗CD39抗体生物活性检测方法缺失的问题，研究人员开发了基于CD39过表达CHO-K1细胞（CHO-K1-huCD39-10B6）的ATP-腺苷（ATP-adenosine）通路功能检测法。该方法通过CellTiter-Glo荧光素酶信号系统实现快速分析，经ICH Q2验证具备60%-140%线性范围及高特异性，为CD39靶向药物（如TTX-030、SRF617）的质控与稳定性研究提供了关键工具。

　　

癌症是21世纪全球公共卫生的重大挑战，每年导致约1000万人死亡。随着免疫治疗的兴起，CD39（ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1）作为ATP-腺苷通路的关键免疫抑制酶成为热门靶点。该酶通过将胞外ATP（eATP）水解为腺苷单磷酸（AMP），在肿瘤微环境（TME）中形成免疫抑制屏障，促进肿瘤免疫逃逸。尽管已有TTX-030等抗CD39抗体进入临床试验，但缺乏标准化生物活性检测方法制约了药物开发。

中国药科大学研究人员通过电转染pCMV_HuCD39-FL-GM质粒构建了高表达CD39的CHO-K1-huCD39-10B6细胞系，并基于CellTiter-Glo荧光素酶检测技术建立了抗CD39抗体生物活性测定方法。该方法通过量化CD39酶活抑制程度反映抗体效能，经ICH Q2验证显示优异性能：特异性方面仅响应CD39靶点；准确度回收率达98%-102%；精密度RSD<10%；在60%-140%效价范围内线性良好（R²

0.99）。该细胞系在15代内保持稳定性，为抗CD39药物的批放行和稳定性研究提供了可靠工具。

关键技术包括：1）电穿孔转染构建CD39稳定表达细胞株；2）流式细胞术筛选高表达克隆；3）基于ATP水解抑制原理的CellTiter-Glo发光检测；4）遵循ICH Q2指南进行方法学验证。

【Cell lines and reagents】
采用ATCC来源的CHO-K1细胞，通过含潮霉素B（hygromycin B）的BalanCD CHO培养基筛选获得稳定转染株。

【Generation of the CHO-K1-huCD39-10B6 cell line】
流式分析显示克隆B6-F3-10B6的CD39表达量最高（较亲本细胞提升20倍），命名为CHO-K1-huCD39-10B6。

【Conclusion】
该研究首次建立了符合质量规范的抗CD39抗体功能检测平台，其机制明确（MOA-indicating）的特点可准确反映药物对CD39介导的eATP-腺苷通路调控作用。相较于传统ELISA等理化方法，该细胞模型更能体现抗体在肿瘤免疫微环境中的实际功能，为IPH5201等临床阶段药物的生物相似性评价提供了新标准。

研究获得国家重点研发计划（2021YFF0600804）和国家药监局重点实验室项目（2023SKLDRS0112）支持，相关成果发表于《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》。作者Yongbo Ni等强调，该方法未来可拓展至其他核苷酸水解酶（如CD73）抑制剂的活性评价，推动肿瘤免疫联合疗法开发。