冻存对罗盘山猪成纤维细胞生物学特性的影响

　　 摘要:

以濒危品种罗盘山猪(Sus scrofa domestica)耳缘组织为材料，利用组织块贴壁法建立罗盘山猪耳缘成纤维细胞系，并对低代次(第3代)及高代次(第9代)成纤维细胞冻存前与复苏后相关生长特性进行分析。研究结果表明：罗盘山猪耳缘成纤维细胞生长状态良好，第3代成纤维细胞纯化程度高于98%；细胞遗传学分析显示细胞具有18对常染色体和1对性染色体，证明该细胞系为稳定二倍体细胞系；细胞支原体检测为阴性，表明该细胞系无支原体污染；第3代及第9代细胞冻存前与复苏后生长曲线均呈现“S”型；第3代细胞冻存前与复苏后活率分别为92.56% ± 1.23%和90.36% ± 1.29%，复苏后细胞周期中DNA合成前期(G1)细胞比例显著增加，但DNA合成后期(G2)期和DNA合成期(S)细胞占比、细胞凋亡率、活性氧水平与衰老水平与冻存前差异不显著；第9代细胞冻存前与复苏后活率分别为83.66% ± 3.18%和72.83% ± 0.59%，复苏后细胞周期中G2期细胞比例未出现显著变化，而G1期与S期细胞占比、细胞凋亡率、活性氧水平与衰老水平与冻存前差异均显著。本研究成功建立了罗盘山猪耳缘成纤维细胞系，通过测定第3代与第9代细胞冻存前与复苏后相关生长特性，证明低代次的罗盘山猪耳缘成纤维细胞在经过冻存后的生长特性更加稳定，更适合长期超低温保存，为后续遗传学等研究提供稳定和优良的材料。