基于sifA缺陷型沙门氏菌递送的3M2e-NP纳米颗粒疫苗联合LTB佐剂增强对H9N2禽流感病毒攻毒的保护效果

本研究针对H9N2禽流感病毒变异导致的疫苗保护力不足问题，通过构建sifA基因缺失的减毒沙门氏菌载体χYL56，递送携带3种M2e表位（H9N2/H5N1/H1N1）与NP蛋白的LS纳米颗粒疫苗（3M2e-NP），并联合大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚基（LTB）佐剂。研究发现，口服免疫S325（含LTB）可显著提升血清IgY、呼吸道与肠道IgA水平，促进脾淋巴细胞增殖及IL-4/IFN-γ分泌，有效降低G57亚型H9N2攻毒后的病毒载量，为开发新型黏膜疫苗提供策略。

　　

H9N2亚型禽流感病毒（AIV）持续威胁家禽养殖与公共卫生安全，其快速变异特性导致传统灭活疫苗难以诱导有效的黏膜免疫。当前商业疫苗存在两大痛点：灭活疫苗虽安全但黏膜应答弱，而减毒活疫苗存在毒力返祖风险。更棘手的是，H9N2病毒可通过呼吸道传播并引发继发感染，造成严重经济损失。面对这一挑战，吉林农业大学的研究团队独辟蹊径，将目光投向两种高度保守的病毒蛋白——基质蛋白2胞外域（M2e）和核蛋白（NP），并创新性地利用基因工程沙门氏菌作为"生物导弹"，在《International Immunopharmacology》发表了突破性研究成果。

研究团队采用三大关键技术：1）利用sifA基因缺失的减毒沙门氏菌χYL56作为抗原递送载体，通过调控延迟裂解机制释放抗原；2）构建基于lumazine synthase（LS）自组装纳米颗粒的嵌合疫苗，表面展示三价M2e（3M2e）与NP蛋白；3）引入大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚基（LTB）作为黏膜佐剂。实验设计包含311（野生型沙门氏菌）、S311（sifA缺失不含LTB）和S325（sifA缺失含LTB）三组疫苗对比。

Bacterial strains and culture conditions
研究选用χYL56菌株（sifA缺失）作为递送载体，其通过破坏沙门氏菌包含空泡（SCVs）的形成，促使细菌在宿主细胞质中裂解释放抗原。

Synthesis of the desired antigens
成功构建pYL311（3M2e-NP-LS）和pYL325（LTB-3M2e-NP-LS）两种质粒，其中LS纳米颗粒作为支架蛋白，实现了3M2e（H9N2/H5N1/H1N1亚型）与NP蛋白的共展示。

Discussion
数据显示：S325组血清IgY抗体效价较对照组提升4倍，支气管肺泡灌洗液IgA增加3.2倍；脾淋巴细胞增殖指数提高2.8倍，IL-4和IFN-γ分泌细胞增加5倍。攻毒实验表明，S325组体重损失率降低67%，气管病毒载量下降2个对数级，口咽/泄殖腔拭子排毒量显著减少。

Conclusions
该研究首次证实sifA缺失与LTB佐剂的协同效应：1）sifA缺失增强抗原递送效率，LTB促进黏膜归巢淋巴细胞活化；2）3M2e-NP-LS纳米结构延长抗原呈递时间；3）Th1/Th2/Th17混合应答模式实现全方位保护。这种"细菌载体-纳米抗原-黏膜佐剂"三位一体策略，为开发广谱禽流感疫苗开辟新路径，尤其对呼吸道黏膜免疫缺陷的现有疫苗体系具有重要补充价值。