马索林酸通过增强HSF1泛素化降解抑制胰腺癌生长的分子机制研究

这篇研究揭示了马索林酸（MA）作为五环三萜类化合物，通过特异性结合热休克因子1（HSF1）的HIS-63和GLN-72位点，促进其泛素化降解，从而抑制胰腺癌细胞增殖并诱导自噬（autophagy）。研究结合分子对接、表面等离子共振（SPR）和免疫共沉淀（Co-IP）技术，证实MA-HSF1互作通过下调mTOR/ULK1/Atg通路增强自噬流，为靶向HSF1的胰腺癌治疗提供了新策略。

　　

引言

胰腺癌作为致死率极高的恶性肿瘤，5年生存率仅5%，亟需新型治疗策略。马索林酸（MA）是从橄榄果皮中提取的五环三萜酸，具有抗炎、抗肿瘤等多重活性。前期研究发现MA通过热休克蛋白A8（HSPA8）介导的自噬通路抑制胰腺癌细胞增殖，但具体机制尚未阐明。本研究聚焦HSF1（HSPA8的转录因子），揭示MA通过直接结合HSF1触发其泛素化降解，进而抑制肿瘤生长的分子机制。

材料与方法

实验采用人胰腺癌Panc-28细胞系，通过CCK8检测细胞活力，Western blot分析蛋白表达，qPCR验证mRNA水平。利用siRNA敲低HSF1，构建HSF1过表达及H63A/G72A突变细胞模型。自噬流通过mRFP-GFP-LC3双荧光标记观察。分子对接（AutoDock Vina）和SPR分析MA-HSF1结合特性，Co-IP检测泛素化水平。

结果

1. HSF1在MA抑癌效应中的核心作用：MA以浓度依赖性抑制Panc-28细胞生长（IC₅₀
   50 μM），Western blot显示HSF1蛋白下调而mRNA不变。敲低HSF1使MA抑制率从81.8%提升至85.9%，过表达则部分逆转抑制作用。
2. MA通过泛素化降解HSF1：蛋白酶体抑制剂MG132可阻断MA对HSF1的降解，Co-IP证实MA显著增强HSF1泛素化修饰。
3. MA-HSF1特异性结合：分子对接显示MA与HSF1的HIS-63和GLN-72形成氢键（结合能6.4 kcal/mol），SPR测定平衡解离常数K_D
   为7.69 μM。突变这两个位点几乎完全消除MA对HSF1的降解作用。
4. 自噬通路激活：MA通过下调p-mTOR、上调p-ULK1/Atg3/5/7及LC3II/I比值诱导自噬，该效应在HSF1突变细胞中显著减弱。

讨论

MA的低毒性（小鼠50 mg/kg无显著毒性）为其临床转化提供优势。研究首次阐明MA通过“结合-泛素化降解”轴靶向HSF1，区别于传统HSF1抑制剂（如槲皮素和斑蝥素）。HSF1的构象变化可能影响其磷酸化状态，从而促进E3泛素连接酶识别。该发现为设计靶向HSF1结合位点的抗癌药物提供了新思路。

结论

MA与HSF1的特异性互作通过增强泛素化降解抑制胰腺癌生长，其结合位点（HIS-63/GLN-72）可作为抗癌药物开发的潜在靶标。研究为基于天然产物的精准抗癌策略提供了理论依据。