MAX Eraser：一种经济高效的室温抗体去除试剂在多重免疫组化中的应用研究

本文推荐一种基于离液剂的新型抗体去除试剂MAX Eraser（ME），可在室温条件下高效解离抗原-抗体复合物，实现多重免疫组化（mIHC）的循环染色。该技术兼容福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本、免疫细胞化学（ICC）和三维成像，支持10次循环染色且保持组织完整性，为实验室级多重空间蛋白成像和生物标志物发现提供简单经济的解决方案。

　　

MAX Eraser技术突破多重成像瓶颈

筛选与建立ME试剂
研究团队通过系统筛选发现间苯二甲胺（MxDA）具有强效抗体去除能力，但伴随120%的组织膨胀率。通过添加十二烷基硫酸钠（SDS）优化配方，最终开发的MAX Eraser（ME，含MxDA+SDS）在保持抗体清除效率的同时，将组织尺寸恢复至原始水平。实验显示，ME能在3小时内完全清除10种不同抗体的荧光信号，且单克隆与多克隆抗体均呈现相似的清除动力学。

多重循环成像验证
在人类胚胎干细胞（hESC）中进行的10轮循环实验证实，ME可稳定实现24种抗体的序贯检测，仅细胞色素C（CytC）等3种抗体出现信号衰减。值得注意的是，通过固定首轮标记的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）作为空间锚点，成功对齐7种抗体信号，AI辅助校正后图像匹配度达96%。

技术兼容性拓展
ME展现出广泛适用性：

1. 在FFPE乳腺癌组织实现胶原蛋白1（COL1）、CD34等6种标志物的三重循环检测；
2. 结合非参考光谱解耦技术PICASSO，单轮检测抗体数量提升至6种，总通量达18种；
3. 在U-2 OS细胞的超分辨率成像中，线粒体标志物细胞色素C氧化酶4（COX4）等5种蛋白的共定位精度达84%-92%；
4. 对2mm厚脑切片进行三维成像，突破传统200μm穿透深度限制。

机制与优势解析
ME的核心作用机制源于MxDA的离液效应——通过破坏氢键和疏水相互作用解离抗原-抗体复合物，而SDS增强蛋白溶解性。相较于微波处理（组织易脱落）和热剥离法（残留信号>50%），ME在室温操作的优势显著。研究同时发现Cy3荧光团在ME处理时会出现异常增强现象，这与染料构象变化相关。

应用前景与局限
该技术为中等通量（10-15重）蛋白空间分析提供经济高效的方案，尤其适合肿瘤免疫微环境研究。当前局限在于需建立ME兼容抗体库，且厚组织成像仍需结合SHIELD等稳定化技术。研究者建议未来可探索ME与DNA-PAINT等超分辨技术的联用，进一步拓展其在纳米级结构解析中的应用价值。