支气管肺泡灌洗液宏基因组下一代测序在免疫缺陷危重患者侵袭性肺曲霉病中的临床价值：一项多中心回顾性研究

本研究通过多中心回顾性分析，证实宏基因组下一代测序（mNGS）对免疫缺陷危重患者的侵袭性肺曲霉病（IPA）诊断具有显著优势：相比传统微生物检测（CMTs），mNGS展现出更高的特异性（96.20% vs 78.85%）和曲线下面积（AUC 0.951 vs 0.872），并能更精准识别混合感染。mNGS指导的抗生素调整使28天死亡率降低20.16%（46.51% vs 66.67%），为ICU精准抗感染治疗提供新策略。

　　

ABSTRACT
免疫缺陷危重患者的侵袭性肺曲霉病（IPA）诊断面临重大挑战。这项多中心回顾性研究纳入中国六家三甲医院ICU的171例患者，证明支气管肺泡灌洗液（BALF）mNGS相较传统方法（CMTs）具有突破性优势：诊断一致性Kappa值达0.638，特异性提升至96.20%，混合感染检出率提高2.68倍。尤其值得注意的是，mNGS对曲霉属菌种的鉴定灵敏度达94.03%，其中烟曲霉（A. fumigatus
）占64.18%，显著优于培养（27.88%）、半乳甘露聚糖（GM）试验（53.73%）等单一方法。

INTRODUCTION
免疫缺陷患者占ICU收治量的三分之一，其IPA死亡率高达53.73%。现有诊断金标准组织病理学存在取样困难问题，而GM试验、PCR等方法受限于灵敏度低（<50%）或操作复杂。mNGS技术通过高通量核酸测序，能同时检测细菌、真菌、病毒等病原体，但真菌细胞壁破壁效率低仍是技术瓶颈。本研究首次系统评估mNGS在免疫缺陷危重人群中的应用价值。

MATERIALS AND METHODS
研究纳入标准涵盖血液肿瘤、实体器官移植等7类免疫缺陷状态。通过BALF样本同步进行mNGS和CMTs检测，采用Illumina NextSeq 550Dx平台测序，数据经Kraken2比对四大微生物数据库。阳性判定标准严格：真菌RPTM比值≥20，特殊病原体如结核分枝杆菌RPTM≥1即判阳性。

RESULTS

1. 临床特征：IPA组中性粒细胞减少比例达41.79%（P
   <0.001），28天死亡率显著高于非IPA组（53.73% vs 32.69%）。
2. 病原谱差异：mNGS检出混合感染59例，CMTs仅22例。烟曲霉、白色念珠菌和EBV构成主要共感染病原体。
3. 诊断效能：mNGS的AUC（0.951）远超GM试验（0.711）和培养（0.620），对曲霉属检测灵敏度达94.03%。
4. 临床影响：mNGS指导的抗生素调整使28天死亡率降低至46.51%，较CMTs组（66.67%）显著改善（P
   <0.05）。

DISCUSSION
研究揭示非粒细胞减少型IPA占比达58.21%，印证了当前流行病学变迁趋势。mNGS在混合感染诊断中的优势尤为突出，其91.80%的部分匹配率提示传统方法可能漏诊关键病原。技术层面，尽管环境基因组污染可能造成4例假阳性，但通过背景微生物数据库比对可有效控制。

LIMITATION
回顾性设计导致组织病理学确认不足，未来需开展前瞻性研究验证。不同中心样本处理差异可能影响结果稳定性，建议建立标准化操作流程。

Conclusion
mNGS作为革命性诊断工具，不仅实现IPA的早期精准识别，更能通过混合感染检测指导个体化治疗，为免疫缺陷危重患者带来生存获益。该技术有望改写ICU侵袭性真菌感染诊疗指南。