金丝桃苷通过TLR4/NF-κB和p62-Nrf2-Keap1信号通路抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的机制研究

（编辑推荐）本研究首次揭示天然黄酮类化合物金丝桃苷（hyperoside）通过双重机制抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）：一方面通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻炎症风暴（IL-6/IL-1β/TNF-α），另一方面激活p62-Nrf2-Keap1轴阻断病毒利用的自噬通路，在细胞和仔猪模型中均展现显著抗病毒效果，为PRRSV防控提供了新型候选药物。

　　

金丝桃苷的抗PRRSV机制解析

ABSTRACT
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是导致母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病的主要病原体，每年造成全球养猪业巨大经济损失。当前缺乏有效疫苗和药物，本研究系统评估了金丝桃苷在体外和体内对PRRSV的抑制作用。结果显示，金丝桃苷能显著抑制PRRSV在MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞（PAMs）中的复制，其机制涉及通过TLR4/NF-κB通路下调促炎细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α）的表达，并通过激活p62/Nrf2/Keap1信号通路缓解病毒诱导的自噬。动物实验证实金丝桃苷可降低仔猪体内病毒载量，减轻肺部病变。

INTRODUCTION
PRRSV作为动脉炎病毒科成员，其高变异性导致防控困难。金丝桃苷是从连翘、山楂等植物提取的黄酮类化合物，既往研究显示其对疱疹病毒、非洲猪瘟病毒等具有广谱抗病毒活性。PRRSV感染会引发过度炎症反应和自噬，而金丝桃苷在神经损伤和败血症模型中已被证实可调控这两条通路，但其对PRRSV的作用尚未阐明。

MATERIALS AND METHODS
实验采用PRRSV-1（GZ11-G1、P073-3）和PRRSV-2（SD16、CH-1a、JXA1、NADC30-like）多毒株验证。通过CCK-8检测金丝桃苷对MARC-145和PAMs的细胞毒性，qPCR和Western blot分析病毒载量及蛋白表达。时间序列实验设计包括预处理、共处理和后处理组，并通过病毒吸附、内化、复制和释放分阶段检测。自噬水平通过mCherry-GFP-LC3荧光斑点和LC3II/I转化率评估，关键通路蛋白（TLR4、p-NF-κB、p62、Nrf2）表达通过Western blot和免疫荧光验证。仔猪实验设置75 mg/kg和150 mg/kg剂量组，监测体温、临床症状和肺部病理变化。

RESULTS

1. 广谱抗病毒活性：金丝桃苷（120 μM）使PRRSV-1和PRRSV-2的N蛋白表达降低2-3倍，病毒滴度（TCID₅₀
   ）下降10²
   -10³
   倍，且对六种毒株均有效。
2. 多阶段抑制作用：时间序列实验显示，金丝桃苷在病毒吸附（降低60%结合率）、内化（抑制40%病毒进入）、复制（减少70%基因组拷贝）和释放（阻断50%病毒粒子分泌）阶段均有效，但无直接灭活作用。
3. 炎症调控机制：金丝桃苷处理使PRRSV诱导的IL-6、TNF-α mRNA水平下降80%，同时抑制TLR4表达和NF-κB磷酸化（p-p65/p-IκB降低65%），siRNA敲除TLR4后该效应消失。
4. 自噬通路干预：病毒感染的LC3II/I比值升高3倍被金丝桃苷逆转（120 μM处理降至1.2倍），且通过上调p62（增加2倍）促进Nrf2核转位（增加1.8倍），Keap1降解增加40%。
5. 体内保护效果：150 mg/kg金丝桃苷使感染仔猪体温峰值从41°C降至40.1°C，肺组织病毒抗原分布减少70%，病理评分改善60%。

DISCUSSION
本研究首次阐明金丝桃苷通过"双通路"抗PRRSV机制：在炎症层面，其通过TLR4/NF-κB轴抑制细胞因子风暴；在自噬层面，激活p62-Nrf2反馈环路阻断病毒利用的LC3II自噬体形成。值得注意的是，p62既是自噬底物又能通过竞争性结合Keap1释放Nrf2，形成正向调控循环。与临床常用抗炎药相比，金丝桃苷兼具抗病毒和免疫调节特性，但其具体分子靶点（如是否直接结合TLR4或Keap1）仍需进一步解析。

CONCLUSIONS
金丝桃苷作为天然化合物，通过协同调控炎症和自噬通路抑制PRRSV复制，在细胞和动物模型中均展示出剂量依赖性保护效果。该研究不仅为PRRSV防控提供了新策略，也为开发基于双通路调控的抗病毒药物提供了理论依据。