胶体金免疫层析技术快速检测黄瓜花叶病毒的开发与评价：一种田间即时诊断新策略

为解决黄瓜花叶病毒（CMV）田间检测技术门槛高、耗时长的问题，研究人员开发了一种基于胶体金免疫层析技术（CGIA）的快速检测方法。通过优化抗原浓度（0.5?μg/mL包被抗原）与金标抗体灵敏度（最低检测限0.25?mg/mL），该试纸条可在10分钟内通过肉眼判读结果，为资源有限地区提供了一种无需实验室基础设施的高效检测工具，对植物病毒防控具有重要实践意义。

　　

黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）作为全球最具破坏性的植物病毒之一，每年给番茄、辣椒等高价值作物造成超过38亿美元的经济损失。这种单链RNA病毒通过80多种蚜虫以非持久性方式传播，感染1200余种植物后引发叶片花斑、畸形等症状，导致作物减产20-50%。尽管现有ELISA、RT-PCR等技术检测精度高，但依赖实验室条件与专业人员，难以满足田间即时防控需求。

针对这一技术瓶颈，山东现代农业产业技术体系的研究团队在《Journal of Virological Methods》发表成果，开发出基于胶体金免疫层析（Colloidal gold immunochromatographic assay, CGIA）的CMV快速检测系统。研究通过原核表达系统获得重组CMV衣壳蛋白（Coat protein, CP），优化金标抗体与抗原浓度后，构建出可在10分钟内完成视觉判读的试纸条。

关键技术包括：1）从CMV Fny株系感染叶片提取RNA并克隆CP基因；2）利用pET-28a载体在大肠杆菌中表达27?kDa重组CP；3）通过SDS-PAGE和Western blot验证蛋白纯度；4）系统优化胶体金粒径（20-40?nm）、抗体标记比例及稳定剂（BSA/硼酸钠/PEG）配方；5）建立双抗原（0.5?μg/mL包被抗原与0.5?mg/mL质控抗原）检测体系。

【Development of CMV-CP expression vector】
通过RT-PCR从CMV感染叶片扩增CP基因，采用BamH I/Not I酶切位点构建pET-28a-CMV-CP重组质粒，测序验证正确性。

【Prokaryotic expression and solubility analysis】
IPTG诱导表达后，SDS-PAGE显示27?kDa目标条带，经镍柱纯化获得可溶性重组CP，Western blot证实其免疫原性。

【Discussion】
研究证实CGIA检测限达0.25?mg/mL，较传统ELISA（1-10?ng）更适合田间应用。试纸条在环境温度波动下仍保持稳定性，突破分子检测对温控设备的依赖。

该成果通过简化CMV检测流程，为资源匮乏地区提供了一种"无仪器"诊断方案。其创新性体现在：1）首次建立CMV特异性CGIA体系；2）实现肉眼可视化的病毒浓度半定量；3）为其他植物病毒即时检测技术开发提供范式。正如通讯作者Xinran Cao强调，这项技术将显著提升田间早期疫情预警能力，助力全球作物病毒防控体系建设。