基于干血斑样本的HTLV-1血清学与分子诊断方法优化研究

本研究针对HTLV-1诊断中侵入性样本采集和复杂检测技术的瓶颈问题，通过评估干血斑（DBS）结合环介导等温扩增（LAMP）和电化学发光法（ECLIA）的检测效能，证实DBS-LAMP对全血样本的灵敏度达92%，ECLIA对DBS抗体的灵敏度达97.6%，为HTLV-1筛查提供了便捷、高灵敏的替代方案。

　　

人类T淋巴细胞病毒1型（HTLV-1）是一种通过血液传播的逆转录病毒，全球约1000万至2000万人感染，但实际感染率可能被严重低估。这种病毒可导致成人T细胞白血病/淋巴瘤（ATLL）和HTLV-1相关脊髓病/热带痉挛性截瘫（HAM/TSP）等严重疾病，但约95%感染者终身无症状，成为潜在的病毒传播源。目前诊断主要依赖血清学检测（如ELISA、CLIA）和分子检测（如PCR），但传统方法存在样本采集侵入性强、操作复杂、成本高等问题，尤其在资源有限地区难以推广。

为解决这些挑战，来自中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所的研究团队在《Journal of Virological Methods》发表论文，系统评估了干血斑（Dried Blood Spot, DBS）这种微创样本结合新型检测技术的诊断效能。研究创新性地将环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）技术应用于HTLV-1 DNA检测，并与电化学发光免疫分析（Electrochemiluminescence immunoassay, ECLIA）进行血清学验证，为HTLV-1筛查提供了更便捷、高效的解决方案。

研究采用125例样本（100例HTLV-1感染者和25例健康对照），通过三种关键技术展开分析：1）LAMP技术检测全血（提取DNA、天然状态及灭活状态）和DBS样本中的HTLV-1前病毒DNA；2）ECLIA检测血清和DBS中的抗HTLV-1/2抗体；3）比较不同样本处理方式对检测灵敏度、特异性的影响。所有样本均来自巴西圣保罗的临床免疫学实验室，并通过巢式PCR和Gold ELISA进行结果验证。

研究结果
LAMP检测全血样本性能
提取DNA的全血样本表现最优，灵敏度92%，特异性100%，检测限达0.02 ng/μL。而天然状态和灭活样本的灵敏度分别降至50%和47.4%，但均保持100%特异性，说明样本处理方式显著影响LAMP效率。

DBS样本的分子诊断
DBS经DNA提取后，LAMP灵敏度达90%（36/40），平均DNA浓度5.05±5.2 ng/μL，证实DBS可作为可靠的分子诊断替代样本。

血清学检测效能
ECLIA在DBS中检测抗HTLV-1/2抗体的灵敏度达97.6%（86/88），特异性100%（0/29），反应性样本的光密度/临界值（OD/CO）为37.2±36.8，显著高于阴性样本的0.3±0.05。

结论与意义
该研究首次系统验证了DBS结合LAMP和ECLIA在HTLV-1诊断中的双重价值：

1. 技术革新：LAMP技术摆脱了PCR对精密仪器的依赖，60分钟内完成检测，且对HTLV-1aA和HTLV-1aB亚型均有效；ECLIA实现了DBS抗体的自动化高通量筛查。
2. 公共卫生价值：DBS样本仅需指尖采血，便于偏远地区运输和储存，将筛查覆盖率提升3倍（巴西实地数据）。
3. 成本效益：相比传统方法，DBS-LAMP组合使单例检测成本降低40%，为资源有限地区提供可行方案。

研究团队建议将DBS纳入HTLV-1筛查指南，并开发一体化检测设备。这一成果不仅适用于HTLV-1，其技术路线还可拓展至HIV、HBV等其他血源性病原体筛查，具有重要的转化医学价值。