MPXV-A5L抗原快速检测试剂的开发与临床评价：一种高特异性诊断工具在资源匮乏地区的应用

为解决全球mpox疫情中快速准确诊断的迫切需求，研究人员开发了基于MPXV核衣壳蛋白A5L的单克隆抗体抗原快速检测试剂(Ag-RDT)。该试剂特异性识别MPXV且不与疫苗病毒(VACV)交叉反应，检测限达0.5 ng/mL，临床样本中qPCR Ct值≤25时灵敏度达87%，特异性100%。这项发表于《Journal of Virological Methods》的研究为资源匮乏地区提供了可靠的即时诊断方案。

　　

近年来，猴痘病毒(MPXV)的全球传播引发公共卫生危机。2022年爆发的IIb型毒株已蔓延至112个国家，而新出现的Ib型毒株在非洲的扩散再次敲响警钟。尽管WHO已不再将其列为国际关注的突发公共卫生事件，但缺乏快速、特异的诊断工具仍是防控瓶颈。当前金标准qPCR检测需专业实验室支持，而现有抗原检测试剂(Ag-RDT)多存在与疫苗病毒(VACV)交叉反应的问题，可能导致误诊。

为应对这一挑战，日本富山大学等机构的研究团队开发了靶向MPXV核衣壳蛋白A5L的新型Ag-RDT。该研究通过免疫大鼠和家兔获得特异性单克隆抗体，利用横向流动免疫层析技术(LFIA)构建检测体系，并采用临床样本验证性能。论文发表于《Journal of Virological Methods》，证实该试剂具有优异的诊断效能。

关键技术方法包括：1) 重组MPXV-A5L蛋白表达纯化；2) 单B细胞分选技术获取特异性抗体；3) 表面等离子共振分析抗体亲和力；4) 使用RK13细胞培养的MPXV和VACV进行交叉反应测试；5) 东京都公共卫生研究所提供的59例临床干拭子样本(qPCR验证)进行性能评估。

【抗体开发与筛选】
通过免疫动物和单细胞分选获得128个大鼠mAb和3个家兔mAb。表位定位显示#2S-36识别MPXV-A5L 100-180位氨基酸，仅与MPXV感染细胞裂解物反应，不与VACV交叉。表面等离子共振测得#2S-36的KD值为1.5×10^-9
M，具备高亲和力。

【检测试剂构建】
将#2S-36作为捕获抗体固定在硝酸纤维素膜T线，#230-9标记纳米纤维素作为检测抗体。标准曲线显示在0-25 ng/mL范围内线性良好(R2=0.9994)，重组蛋白检测限达0.5 ng/mL。病毒培养液检测限为440 PFU/test(Ⅱb型)和2112 PFU/test(Ⅰ型)，显著优于WHO推荐的10⁶
PFU/mL标准。

【临床性能验证】
在23例高病毒载量样本(qPCR Ct≤25)中检出20例，灵敏度87%(95%CI 66%-97%)；27例低载量样本(Ct 26-40)和10例阴性样本均未检出，特异性100%。与麻疹病毒、柯萨奇病毒等常见病原体无交叉反应，20种呼吸道细菌检测均为阴性。

该研究的创新性体现在：1) 首次靶向MPXV-A5L蛋白开发诊断试剂，相比常见A29靶点更保守；2) #2S-36抗体识别结构表位，实现MPXV/VACV精准区分；3) 检测灵敏度达商业试剂的10-100倍。尽管对低病毒载量样本检出率有限，但能满足传染期患者诊断需求。

讨论部分强调，该Ag-RDT在资源匮乏地区具有重要应用价值：15分钟快速出结果、无需专业设备、室温稳定保存1年。随着MPXV变异加速，针对核心蛋白A5L的诊断策略可避免因抗原变异导致的检测失效。研究者建议后续优化样本处理流程，提升低载量样本检出率。

这项研究不仅为mpox防控提供了实用工具，其单B细胞分选和表位精确定位技术路线也为其他新发传染病诊断试剂开发提供了范式。AMED等机构的资助保障了研究的持续深入，未来可进一步拓展至其他高负担地区的现场验证。