非洲猪瘟病毒抗体检测的免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)建立及其高灵敏特异性验证

为解决低毒力非洲猪瘟病毒(ASFV)核酸漏检难题，中国农业科学院团队基于HLJ18/BK33细胞适应株建立免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)。该技术灵敏度达10?3 稀释度，特异性100%，可替代商业iELISA，为基层ASF防控提供经济高效的血清学"金标准"。

　　

非洲猪瘟(ASF)被称为养猪业的"头号杀手"，其病原体非洲猪瘟病毒(ASFV)能造成家猪100%死亡率。近年来，中国田间出现的低毒力ASFV变异株（如HLJ/HRB1/20）更显狡猾——它们潜伏期长、症状隐蔽，核酸检测常出现"假阴性"，犹如披着羊皮的狼。世界动物卫生组织(WOAH)紧急呼吁：必须建立可靠的抗体监测体系，才能揪出这些"隐形杀手"。

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所团队发现，现有检测技术存在明显短板：间接免疫荧光(IFA)需要昂贵荧光显微镜，而商品化酶联免疫吸附试验(iELISA)灵敏度不足。研究人员另辟蹊径，利用实验室培育的"驯化版"病毒——将高致病性Pig/HLJ/18株在野猪肾细胞(BK2258)上传代33代获得的HLJ18/BK33株，开发出新型免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)。这项研究近期发表于《Journal of Virological Methods》。

关键技术包括：采用BK2258细胞培养系统优化病毒接种剂量（10^?3
稀释度最佳）；使用608份猪血清验证性能；对比商业iELISA试剂盒；交叉反应测试涵盖6种常见猪病原体阳性血清。

病毒接种条件优化
通过梯度稀释实验发现，10^?3
稀释度感染的细胞与阳性血清反应时，能产生最清晰的红褐色信号，且背景最干净。这为后续标准化操作奠定基础。

方法学验证
在包含自然感染血清、实验感染血清的608份样本中，IPMA的灵敏度比iELISA高15%，特异性达100%。尤为关键的是，它能检出低毒力株HLJ/HRB1/20和SD/DY-I/21的感染血清，破解了核酸漏检困局。

特异性验证
面对猪瘟病毒、伪狂犬病病毒等6种病原体的阳性血清，IPMA表现出完美的"免疫指纹"识别能力，证实其抗体检测的专属"身份证"功能。

讨论与结论
这项研究创造性地将细胞适应株的稳定性与IPMA的直观性相结合：普通光学显微镜即可判读，成本仅为IFA的1/5。作为WOAH推荐的血清学金标准，该技术不仅能早期捕捉ASFV感染，还可用于疫苗免疫效果评价。中国农业科学院团队特别指出，该方法在基层应用中展现出"双高特性"——高灵敏性（发现潜伏感染）、高可行性（县乡实验室可开展），为ASF净化计划提供了关键技术支撑。

值得注意的是，IPMA的成功建立得益于三大创新支点：①选用减毒株HLJ18/BK33保证生物安全性；②野猪肾细胞系BK2258提升病毒培养效率；③过氧化物酶标记系统实现信号放大。未来，该技术或将成为中国ASF区域化防控的重要技术抓手，助力实现"早发现、早处置"的防疫目标。