基于多组学生物信息学分析与实验验证的WISP1/WTAP轴调控食管鳞癌奥沙利铂耐药及巨噬细胞极化的分子机制研究

推荐：本研究针对食管鳞癌(ESCC)奥沙利铂(OHP)耐药难题，通过多组学分析发现WISP1/WTAP轴通过m6 A修饰调控PI3K/AKT通路，证实其通过稳定WISP1 mRNA促进肿瘤恶性进展并诱导M2型巨噬细胞极化，为克服铂类耐药提供新靶点。

　　

食管癌是全球高侵袭性上消化道肿瘤，其中90%为食管鳞癌(ESCC)，患者确诊时多已进展至中晚期，5年生存率不足20%。奥沙利铂(OHP)作为第三代铂类药物，虽较顺铂毒性更低，但耐药性仍是临床重大挑战。肿瘤微环境中M2型巨噬细胞通过分泌促炎因子促进肿瘤进展，而Wnt1诱导信号通路蛋白1(WISP1)作为CCN家族成员，在多种癌症中高表达并与不良预后相关。然而，WISP1是否通过表观遗传调控参与ESCC耐药及免疫微环境重塑尚属空白。

山东省立医院研究人员在《Letters in Drug Design》发表研究，通过GEO数据库筛选ESCC差异基因，结合TCGA数据分析甲基化调控网络，采用qRT-PCR、Western blot、CCK-8、Transwell、流式细胞术等技术，首次揭示WTAP通过m⁶
A甲基化修饰稳定WISP1 mRNA的分子机制。研究纳入43对ESCC组织样本，使用KYSE-30/KYSE-150细胞系及THP-1巨噬细胞模型，通过MeRIP、RIP和放线菌素D实验验证RNA稳定性调控。

WISP1表达在ESCC组织及细胞中上调
生物信息学分析显示WISP1是CCN家族中唯一在ESCC显著高表达的基因。临床样本验证其mRNA和蛋白水平在肿瘤组织中分别升高3.2倍和2.8倍(P<0.001)，且高表达患者预后更差。

WISP1沉默抑制ESCC恶性表型并增强OHP敏感性
shRNA敲低WISP1使KYSE-30细胞凋亡率从8.3%升至27.6%(P<0.01)，迁移能力降低62%，OHP的IC₅₀
值由12.4μM降至5.8μM。机制上，WISP1缺失使p-PI3K/PI3K比值下降0.45倍(P<0.01)。

WISP1调控巨噬细胞M2极化
条件培养基实验显示，WISP1敲除使THP-1-M0细胞中CD206⁺
比例从34.7%降至15.2%，TGF-β1 mRNA降低2.1倍(P<0.01)，证实其通过分泌因子影响肿瘤微环境。

WTAP通过m⁶
A修饰稳定WISP1 mRNA
TCGA预测WTAP是WISP1第四大甲基转移酶。实验证实WTAP敲除使WISP1半衰期从8.2h缩短至4.5h，MeRIP显示m⁶
A抗体对WISP1的结合效率降低67%(P<0.01)。

WISP1过表达逆转WTAP敲除效应
回补实验表明，oe-WISP1可恢复WTAP缺失导致的细胞增殖抑制(克隆数从58增至132)和OHP敏感性变化(IC₅₀
回调至9.3μM)，证实WTAP功能依赖WISP1。

该研究创新性揭示WTAP-WISP1轴通过三重机制促进ESCC进展：1）表观遗传稳定WISP1 mRNA；2）激活PI3K/AKT通路促进增殖并抑制凋亡；3）诱导M2巨噬细胞极化塑造免疫抑制微环境。临床意义在于：首次将m⁶
A修饰与ESCC化疗耐药关联，为联合靶向治疗提供新策略——同时抑制WTAP甲基化活性和阻断WISP1分泌可能成为克服铂类耐药的有效方案。未来需在PDX模型中验证靶向该轴的疗效，并探索其与PD-1抑制剂联用的协同效应。