基于AQbD的绿色RP-HPLC方法开发与评价：美沙拉嗪（5-ASA）分析的可持续性、成本效益与操作可靠性研究

为解决传统RP-HPLC方法毒性溶剂污染及缺乏系统性优化的问题，研究人员结合分析质量源于设计（AQbD）、绿色分析化学（GAC）和白色分析化学（WAC）原则，开发了以乙醇为溶剂的环保型RP-HPLC方法，用于美沙拉嗪（5-ASA）定量分析。该方法线性范围10–160?μg/mL，LOD/LOQ达1.27/3.85?μg/mL，并通过降解实验验证稳定性，生态评分（92）与AGREE指标（0.76）凸显其可持续性与实用性。

　　

背景与问题
美沙拉嗪（5-aminosalicylic acid, 5-ASA）是治疗溃疡性结肠炎和炎症性肠病（IBD）的核心药物，但其现有分析方法存在两大痛点：一是传统反相高效液相色谱（RP-HPLC）依赖甲醇、乙腈等有毒溶剂，产生大量有害废液；二是方法开发多采用“单变量优化”模式，缺乏系统性设计，导致 robustness（稳健性）不足。更棘手的是，国际协调会议（ICH）Q14指南已强制要求将分析质量源于设计（Analytical Quality by Design, AQbD）纳入方法开发流程，而现有文献鲜少整合绿色分析化学（Green Analytical Chemistry, GAC）与白色分析化学（White Analytical Chemistry, WAC）理念，难以兼顾环保性、普适性与高效性。

研究设计与技术方法
SRM药学院的研究团队通过中央复合设计（Central Composite Design, CCD）优化乙醇比例（50%）和流速（1?mL/min），建立以Zorbax SB-C₁₈
色谱柱（4.6?mm×150?mm, 5?μm）为核心的RP-HPLC方法，流动相为乙醇-水（50:50, v/v），检测波长232?nm。研究涵盖线性范围验证（10–160?μg/mL）、灵敏度测试（LOD 1.27?μg/mL, LOQ 3.85?μg/mL）及强制降解实验（酸、碱、氧化、热条件），并采用Analytical Eco-Scale、AGREE、BAGI和RGB12算法评估环保性与实用性。

研究结果

1. 方法优化与验证：5-ASA在1.130?min内高效洗脱，线性回归系数达0.999。强制降解显示碱性（15.6%）和酸性（18.39%）条件下降解显著，氧化（10.16%）与热（1.96%）条件相对稳定。
2. 绿色与白色指标：Analytical Eco-Scale评分92（满分100），AGREE指数0.76（接近理想值1），BAGI评分80.0，RGB12白度值85.7，证实方法低毒、低成本且易推广。
3. 比较优势：相较于文献方法，本研究减少有机溶剂用量50%，分析时间缩短40%，且无需梯度洗脱。

结论与意义
该研究首次将AQbD、GAC与WAC三元理念融合，构建了美沙拉嗪分析的“绿色-蓝色-白色”多维评价体系。乙醇替代有毒溶剂不仅降低碳足迹，还通过CCD设计实现方法稳健性，满足ICH Q14要求。其意义在于：

1. 环保性：避免传统RP-HPLC的生态危害，符合全球减碳趋势；
2. 经济性：乙醇成本仅为乙腈的1/5，适合资源有限地区；
3. 技术民主化：WAC原则推动方法普适性，缩小分析技术鸿沟。
   正如作者Ashish Sriram Mishra和Manimaran Vasanthan所述，此方法为制药行业提供了一种兼顾性能与可持续性的新范式，未来可扩展至其他API（活性药物成分）分析领域。