肯尼亚沿海Kwale县主要疟疾媒介的表型和基因型杀虫剂抗性特征研究

本研究针对肯尼亚Kwale县疟疾媒介对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性问题，通过表型抗性检测和代谢机制基因分析，揭示了Anopheles gambiae和An. funestus复合体对氯菊酯（死亡率58.7%/57.1%）和溴氰菊酯（51%/76%）的广泛抗性，证实细胞色素P450（CYP6P9a/b）和谷胱甘肽-S-转移酶（GSTe2-L119F）介导的代谢抗性是关键机制。PBO（胡椒基丁醚）可完全恢复媒介敏感性，为当地推广吡啶-PBO蚊帐提供了科学依据。

　　

研究背景与意义
在非洲疟疾防控中，长效杀虫蚊帐（LLINs）和室内滞留喷洒（IRS）曾是关键措施，但2016年后进展停滞，部分归因于媒介蚊虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的广泛抗性。肯尼亚沿海Kwale县作为疟疾流行区，2017年报道An. funestus对拟除虫菊酯敏感，而An. gambiae已出现低频率击倒抗性基因（kdr L1014S）。随着2021年新一轮溴氰菊酯蚊帐的发放，抗性演化风险加剧。当地甘蔗和水稻种植区的农药使用可能进一步加速抗性选择，但缺乏最新抗性机制数据。

肯尼亚医学研究所（KEMRI）等机构的研究人员开展了为期11个月（2023-2024年）的媒介监测，通过表型-基因型关联分析，首次系统评估了Kwale县两种主要媒介的当前抗性谱及其分子基础。论文发表于《Malaria Journal》，为优化当地疟疾干预策略提供了关键证据。

关键技术方法
研究采用WHO标准管式生物测定法检测成蚊对5类杀虫剂的敏感性；通过PCR鉴定复合体中的 sibling species；使用实时定量PCR（qPCR）分析kdr基因（L1014S/F）；通过限制性片段长度多态性（RFLP-PCR）检测CYP6P9a/b、GSTe2-L119F和6.5kb结构变异（SV）；利用逻辑回归模型评估基因型与表型关联性。样本来自12个村庄的幼虫栖息地和CDC光诱集成蚊。

研究结果
1. 表型抗性特征
对1826只An. gambiae和715只An. funestus的测试显示，两种媒介对氯菊酯（死亡率58.7% vs 57.1%）和溴氰菊酯（51% vs 76%）均产生抗性，但对DDT、恶虫威和甲基嘧啶磷保持完全敏感。PBO预暴露使溴氰菊酯死亡率升至100%，证实代谢抗性主导。

2. 抗性基因分布
在An. arabiensis和An. quadriannulatus中检出kdr-East（L1014S频率0.083/0.074）和kdr-West（L1014F频率0.063/0.043）；An. funestus s.s.和An. rivulorum携带CYP6P9a（R等位基因频率0.05/0.25）、CYP6P9b（0.42/0.16）及6.5kb SV（插入频率0.25/0.75）。GSTe2-L119F突变频率较低（0.02-0.16）。

3. 基因-表型关联
逻辑回归显示，上述基因型与存活率无显著统计学关联（CYP6P9a OR=0.79, p=0.0765；kdr-L1014F OR=0.11, p=0.058），提示可能存在未检测的互补抗性机制。

结论与讨论
该研究首次报道Kwale县An. funestus对拟除虫菊酯的抗性演化，证实PBO可逆转抗性，支持WHO关于吡啶-PBO蚊帐的推荐。尽管kdr和代谢基因频率仍较低，但其多态性表明抗性处于早期选择阶段。值得注意的是，农业杀虫剂使用可能加速抗性扩散，需加强跨部门监测。

研究局限性包括An. funestus幼虫样本量不足，且未检测其他代谢基因（如CYP6M4）。作者建议未来研究应结合转录组学分析，并评估5-10倍杀虫剂浓度下的抗性水平。这些发现直接指导了肯尼亚国家疟控规划（NMCP）2025年吡啶-PBO蚊帐的部署决策，为非洲类似地区提供了抗性管理范式。