猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)感染与康复期PBMCs转录组比较分析揭示KLF6/NF-κB-IL-8信号轴调控中性粒细胞活化机制

本研究针对猫传染性腹膜炎(FIP)这一高致死率病毒性疾病，通过比较健康猫(Normal)、患病猫(FIPD)和GS-441524治疗康复猫(FIPR)的外周血单个核细胞(PBMCs)转录组，首次系统揭示了FIPV感染过程中KLF6/NF-κB通过激活IL-8信号通路驱动中性粒细胞脱颗粒的分子机制，为理解FIP免疫病理机制和GS-441524治疗作用提供了新视角。

　　

猫传染性腹膜炎(FIP)是由猫冠状病毒(FCoV)突变引起的致死性疾病，尽管GS-441524（瑞德西韦前体药物）在临床治疗中展现出显著疗效，但其免疫调节机制仍不明确。这一"病毒-免疫"互作黑箱成为制约FIP精准治疗的关键瓶颈。

为破解这一难题，来自韩国国家科学技术研究委员会资助的研究团队在《Laboratory Animal Research》发表创新性研究。研究人员通过建立健康猫(Normal)、FIP患病猫(FIPD)和GS-441524治疗康复猫(FIPR)三组队列，采用QuantSeq 3'-mRNA测序技术对PBMCs进行转录组分析，结合IPA和KEGG生物信息学分析，并利用RT-qPCR验证关键分子表达。

主要技术方法

1. 动物模型：建立临床确诊的FIPD猫(n=3)和GS-441524治疗康复的FIPR猫(n=3)队列
2. 转录组测序：采用QuantSeq 3'-mRNA-Seq技术进行高通量测序(Illumina NextSeq 500/550)
3. 生物信息学分析：通过IPA和KEGG解析差异表达基因(DEGs)的功能通路
4. 实验验证：RT-qPCR检测IL-8、TLR4/8、MyD88和KLF6等关键分子表达

Differential mRNA expression in the PBMCs between normal,FIPD,and FIPR groups
研究发现FIPD/Normal组存在677个差异表达基因(DEGs)，其中IL-8(4.997倍)、S100A9(5.903倍)和TLR4(5.671倍)显著上调。FIPR/FIPD组431个DEGs显示这些炎症因子表达回落，提示GS-441524可逆转FIP相关的免疫紊乱。

Activated inflammatory signal in PBMCs of FIP cats
IPA分析揭示中性粒细胞脱颗粒和IL-8信号通路在FIPD组显著激活(z-score=2.3)，而在FIPR组被抑制。KEGG分析进一步证实中性粒细胞胞外诱捕网(NET)形成通路富集，暗示FIPV可能通过NETosis加剧炎症损伤。

Activation of IL-8 by KLF6 and NF-κB signaling pathways
上游调控分析发现KLF6(2.357倍)和NF-κB通路关键分子MyD88(2.909倍)在FIPD组显著激活。RT-qPCR验证显示KLF6与IL-8表达高度正相关(r=0.89)，证实KLF6-NF-κB-IL-8轴是驱动中性粒细胞活化的核心机制。

结论与意义
该研究首次绘制了FIP病程中PBMCs的动态转录图谱，阐明KLF6通过激活NF-κB上调IL-8表达，进而促进中性粒细胞脱颗粒和NET形成的级联反应。这不仅揭示了GS-441524通过抑制该通路发挥治疗作用的分子基础，也为人类冠状病毒疾病（如COVID-19）的免疫调节治疗提供了跨物种参考。研究发现S100A8/A9-TLR4-IL-1β的正反馈循环可能是FIP炎症风暴的关键驱动因素，为开发靶向免疫调节疗法指明了新方向。

值得注意的是，研究局限在于样本量较小(n=3/组)，且未直接检测中性粒细胞功能。未来研究可结合单细胞测序和流式细胞术进一步验证KLF6-IL-8轴在特定免疫细胞亚群中的作用。这些发现为理解冠状病毒相关免疫病理机制提供了重要理论框架，具有潜在的转化医学价值。