口腔鳞癌液体活检新策略：口腔漱液与血浆ctDNA整合分析提升突变检测与预后预测

本研究针对HPV阴性口腔鳞癌(OSCC)早期复发监测难题，创新性整合口腔漱液与血浆循环肿瘤DNA(ctDNA)分析。通过551基因NGS panel检测123例患者配对样本，发现联合检测使突变检出率提升至48.6%，并构建包含TP53/TERT/IKZF1等7个基因的机器学习模型（验证AUC 0.854）。纵向监测显示ctDNA可早于临床复发4个月预警，为OSCC精准诊疗提供新范式。

　　

口腔鳞状细胞癌(OSCC)作为头颈部鳞癌的主要亚型，全球每年新增病例超37万例，其中90%为HPV阴性型。这类患者面临严峻的临床挑战：近半数会出现早期复发，而传统影像学监测受治疗后纤维化干扰，常导致诊断延迟。更棘手的是，HPV阴性OSCC缺乏可靠的分子标志物，使得精准治疗和疗效监测举步维艰。在此背景下，郑州大学第一附属医院的研究团队将目光投向了液体活检技术，通过创新性地整合口腔漱液和血浆两种来源的循环肿瘤DNA(ctDNA)，为这一临床困境带来突破性解决方案。

研究团队采用551基因靶向测序panel，对123例HPV阴性OSCC患者的肿瘤组织、口腔漱液和血浆样本进行系统分析。在技术方法上，研究包含四个关键环节：1）前瞻性队列构建（中国单中心123例患者，含30例纵向监测子集）；2）多源样本同步采集（组织、口腔漱液20mL、血浆）；3）NGS文库构建（KAPA/Vazyme建库试剂盒，NovaSeq 6000平台150bp双端测序）；4）机器学习建模（随机森林算法整合7基因突变与临床分期参数）。

研究结果呈现四大核心发现：

1. 突变谱特征分析
   肿瘤组织检出1284个突变（中位数10个/样本），TP53(60.1%)、TERT(50.4%)、MYC(43.1%)和PIK3CA(39.8%)为高频突变基因。口腔漱液ctDNA检出率显著高于血浆(94.3% vs 80.5%)，但晚期患者差异消失(92.7% vs 89.1%)。值得注意的是，联合检测使突变检出灵敏度提升至48.6%，且口腔漱液与血浆ctDNA浓度无相关性（r=0.0468）。

2. 预后模型构建
   通过机器学习筛选出7个关键基因（TP53/TERT/IKZF1/EP300/MYC/EGFR/PIK3CA）和2个临床因素（T分期和淋巴结转移）。随机森林模型表现最优，验证队列AUC达0.854。其中EGFR突变预测权重最高，风险分层可显著区分患者生存差异（高风险组PFS的HR=4.977，p<0.001）。

3. 治疗前ctDNA临床价值
   血浆ctDNA阳性状态与不良预后强相关（PFS的HR=3.311，p<0.001）。整合ctDNA状态使模型C-index从0.730提升至0.756，而ctDNA浓度预后价值有限（PFS的HR=1.039，p=0.88）。

4. 动态监测应用
   在19例复发患者中，ctDNA平均早于临床复发132天（口腔漱液）和120天（血浆）被检出，其中9例实现双样本同步预警。典型病例显示复发时TP53突变等位基因频率(VAF)从基线8.37%飙升至30.03%，并出现FGFR1/ZNF703等新发扩增。

这项发表于《npj Precision Oncology》的研究具有三重里程碑意义：首先，确立了口腔漱液作为OSCC液体活检新来源的临床价值，其高敏感性特别适合早期病变监测；其次，首次证明整合多源ctDNA可显著提升突变检出率，为克服肿瘤异质性提供新思路；最后，构建的7基因预后模型实现了OSCC复发风险的精准量化，其中TP53/TERT等驱动基因的演化规律为靶向治疗指明方向。特别值得关注的是，研究发现治疗可诱导克隆重塑（如获得性CDKN2A/B缺失），这为理解耐药机制提供了分子窗口。该成果不仅为OSCC诊疗建立了新型生物标志物体系，其"组织+液体"双维监测模式也可拓展至其他实体瘤研究领域。