单克隆抗体中和金黄色葡萄球菌丝氨酸蛋白酶样蛋白B（SplB）诱导的病理损伤

这篇研究报道了一种靶向金黄色葡萄球菌（S. aureus）毒力因子丝氨酸蛋白酶样蛋白B（SplB）的单克隆抗体（mAb α-SplB1），通过高特异性结合（KD 37.9 nM）和剂量依赖性中和作用，完全阻断SplB的酶活性（1:2摩尔比）及血管渗漏效应，为抗S. aureus被动免疫治疗提供了新策略。

　　

摘要

金黄色葡萄球菌（S. aureus）作为革兰氏阳性机会性病原体，可引发从皮肤感染到败血症的严重疾病。其毒力因子丝氨酸蛋白酶样蛋白B（SplB）通过促进2型免疫反应、灭活补体因子（如C3）及诱导血管损伤参与发病。本研究通过杂交瘤技术制备了小鼠单克隆抗体α-SplB1，其特异性结合SplB（EC₅₀
0.12 μg/mL），无交叉反应性，并通过微尺度热泳（MST）测得K_D
为37.9 nM。体外实验中，α-SplB1以1:2摩尔比完全中和SplB的酶活性，阻断补体C3裂解；小鼠模型中，150 μg抗体预处理显著抑制SplB诱导的血管渗漏，证实其治疗潜力。

引言

S. aureus的临床治疗因抗生素耐药性（如MRSA）面临挑战，靶向毒力因子的疫苗策略屡屡失败。SplB作为位于νSaβ基因组岛的分泌蛋白，在60%临床分离株中表达，具有促过敏和免疫抑制双重功能。前期研究表明，SplB通过Th2极化及补体灭活（如裂解C3α链）促进感染，但其特异性抑制工具缺乏。

结果

α-SplB1结合特性
抗体可变区与胚系序列高度相似（重链94.9%，轻链98.6%），通过ELISA和Western blot证实其识别线性表位。热稳定性分析显示熔解温度（T_m
）为69.1°C，适合体内应用。

特异性验证
尽管SplB与其他Spls（SplA/F等）同源性达47.7%-62.9%，α-SplB1仅结合SplB，且在菌株NCTC 8325-4和D29分泌组中检测到2.8-6.0 ng/μg SplB，无交叉反应。

功能中和
荧光底物（Ac-VEID-MCA）实验显示，1:1摩尔比中和66%活性，1:2时完全抑制。天然SplB（来自CC5/8/25菌株）活性同样被阻断。Western blot证实α-SplB1阻止SplB对C3α链的裂解。

体内保护
小鼠提睾肌模型显示，10 μg SplB引发显著FITC-葡聚糖渗漏，而150 μg α-SplB1预处理（1:2.2摩尔比）几乎完全阻断该效应，证实其抑制内皮损伤的能力。

讨论

α-SplB1的胚系样结构赋予其高特异性，但多价疫苗（如联合靶向α-溶血素或葡萄球菌蛋白酶）可能是未来方向。局限性在于未验证感染模型中的保护效果，因S. aureus蛋白酶功能冗余（如Aureolysin和Staphopains）。研究为被动免疫提供了候选抗体，并揭示了SplB在血管病理中的新机制。

材料与方法

技术细节包括：SplB在大肠杆菌（E. coli）中表达纯化，杂交瘤筛选通过His标签ELISA，体内实验使用C57BL/6N小鼠（伦理批准号ROB-55.2Vet-2532.Vet_02-17-68），数据统计采用GraphPad Prism 8.0.1。