MARCH6通过TOLLIP介导的选择性自噬降解靶向病毒NS5蛋白抑制坦布苏病毒复制

这篇研究揭示了禽类E3泛素连接酶MARCH6通过非经典机制抑制坦布苏病毒（TMUV）复制的新机制。研究发现MARCH6不依赖其E3泛素连接酶活性，而是通过跨膜结构域直接结合病毒NS5蛋白，并招募自噬受体TOLLIP形成MARCH6-NS5-TOLLIP轴，将NS5定向运输至自噬体降解。该发现为抗黄病毒药物开发提供了新靶点，并拓展了选择性自噬（selective autophagy）在抗病毒防御中的认知边界。

　　

TMUV感染诱导MARCH6表达
坦布苏病毒（TMUV）作为新发黄病毒，自2010年起在亚洲鸭养殖区引发大规模疫情。研究发现TMUV感染可显著上调鸭胚成纤维细胞（DEFs）和鸭卵泡膜细胞中MARCH6的mRNA和蛋白水平，且该诱导呈现时间与剂量依赖性。免疫印迹显示MARCH6表达与病毒E蛋白及RNA水平正相关，提示其可能参与宿主抗病毒应答。

MARCH6以E3连接酶非依赖方式抑制TMUV复制
功能实验表明，过表达MARCH6可使病毒RNA降低2.2倍，显著减少E和NS5蛋白表达及病毒滴度（TCID₅₀
测定）；而敲低MARCH6则促进病毒复制。令人意外的是，缺失RING结构域（ΔRING）或催化位点突变体（C10A）仍保留抗病毒活性，证明MARCH6不依赖经典泛素化途径发挥作用。

MARCH6特异性降解NS5蛋白
系统性筛选发现MARCH6仅选择性降低病毒NS5蛋白水平，且该调控发生在翻译后阶段：环己酰亚胺（CHX）追踪实验显示NS5半衰期显著缩短，而mRNA水平未受影响。NS5作为黄病毒最大非结构蛋白，其甲基转移酶（MTase）和RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）结构域对病毒复制至关重要。

跨膜结构域介导NS5结合与降解
免疫共沉淀（co-IP）和共定位实验证实MARCH6通过315-699氨基酸区段（含跨膜结构域）直接结合NS5的MTase和RdRp双结构域。内源性互作验证该机制在天然感染中存在，而ΔRING突变体仍能降解NS5，再证E3活性非必需。

自噬-溶酶体途径介导NS5清除
机制研究表明，自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）、氯喹（CQ）和巴弗洛霉素A1（Baf A1）可阻断NS5降解，而蛋白酶体或凋亡抑制剂无效。激活自噬（Torin1或EBSS饥饿处理）则增强降解效应。敲低自噬关键基因ATG5或BECN1可逆转MARCH6的抗病毒作用，且共聚焦显微镜观察到NS5与LC3B标记的自噬体共定位。

TOLLIP作为新型货物受体参与降解
在六种自噬受体筛选中，TOLLIP被鉴定为关键介质：MARCH6特异性增强NS5-TOLLIP互作，而敲低TOLLIP（非OPTN/NBR1）会破坏NS5降解并恢复病毒滴度。有趣的是，TOLLIP通过其Toll/IL-1受体结合域（TBD）与MARCH6结合，且NS5降解不依赖TOLLIP的泛素结合CUE结构域——免疫沉淀证实NS5泛素化水平不受MARCH6调控，揭示了非经典泛素化途径的降解机制。

讨论与展望
该研究首次阐明MARCH6通过"诱饵-桥梁"模式（bait-and-bridge）将病毒NS5递送至TOLLIP介导的选择性自噬通路，为抗黄病毒策略提供新思路。未来需探究MARCH6是否对其他黄病毒（如登革病毒、寨卡病毒）NS5具有交叉抑制作用，以及如何优化这一通路用于广谱抗病毒设计。

（注：全文严格依据原文实验数据归纳，未添加非文献支持内容）