综述：探索癌症治疗中的合成致死：CRISPR-Cas9技术带来新希望

这篇综述系统阐述了CRISPR-Cas9技术在癌症合成致死（SL）研究中的突破性应用，重点探讨了其如何通过高通量筛选揭示基因互作网络，识别新型治疗靶点（如PARPis/BRCA、WEE1、ATR等），并解析耐药机制。文章整合了CRISPR筛选（包括CRISPRi/a）在突变配对、药物联用及多组学交叉验证中的策略，为精准医学提供了从基础到临床的转化视角。

　　

背景
合成致死（SL）概念源于果蝇研究，指两个基因同时失活导致细胞死亡，而单独失活则无影响。这一现象在癌症治疗中具有重要价值，例如PARP抑制剂（PARPis）对BRCA突变肿瘤的显著疗效。随着CRISPR-Cas9技术的成熟，其高效、精准的基因编辑能力为SL研究提供了全新工具。

SL效应与分类
SL可分为无条件型和条件型两类。无条件型SL不依赖特定条件，如BRCA突变细胞对PARP抑制的敏感性；条件型SL则需特定刺激（如DNA损伤剂或代谢压力）触发。近年研究发现，SL不仅存在于基因对之间，还可扩展至功能通路和细胞器层面，例如DNA损伤修复（DDR）通路中的ATM/ATR互作。

CRISPR技术原理
CRISPR-Cas9系统由向导RNA（sgRNA）和Cas9核酸酶组成，通过sgRNA引导Cas9靶向切割DNA。其应用已从基因敲除扩展到转录调控（CRISPRi/a）。全基因组CRISPR筛选通过构建sgRNA文库，结合深度测序，可系统性分析基因功能依赖性和药物敏感性。

应用场景

1. 靶点发现：在KRAS突变胰腺癌中，CRISPR筛选揭示了MEK抑制剂的SL靶点；TP53突变肿瘤中，WEE1抑制剂显示出协同致死效应。
2. 耐药机制：针对PARPis耐药性，筛选发现ALC1基因缺失可恢复药物敏感性。此外，联合ATR抑制剂（如M6620）可克服铂类耐药。

挑战与展望
尽管CRISPR筛选存在脱靶效应和库复杂度等问题，但通过高保真Cas9变体（如SpCas9-HF1）和单细胞技术（如Perturb-seq）可优化结果。未来，结合人工智能和多组学数据将加速SL靶点的临床转化，为耐药肿瘤患者提供新希望。

临床转化
目前多项临床试验（如NCT04298008）正在评估SL靶向药物（如AZD6738联合奥拉帕尼）的疗效。这些研究不仅验证了CR筛选的预测价值，也推动了个体化治疗的发展。

结论
CRISPR-Cas9技术正重塑癌症治疗范式，其与SL策略的结合为攻克肿瘤异质性和耐药性提供了革命性路径。随着技术迭代和跨学科融合，精准医学时代下的合成致死疗法将迎来更广阔前景。