免疫检查点LILRB4在慢性淋巴细胞白血病中的免疫逃逸作用及临床预后价值研究

本研究针对慢性淋巴细胞白血病(CLL)免疫逃逸机制，聚焦免疫检查点LILRB4(ILT3)的临床意义。通过分析126例患者样本，发现LILRB4在恶性B细胞中异常高表达，且与疾病进展、治疗间隔缩短和生存率降低显著相关。机制研究表明，LILRB4通过TLR9/BTK信号通路促进增殖性白血病亚群形成，抑制T/NK细胞毒性，其可溶性形式(sLILRB4)可作为预测继发恶性肿瘤的生物标志物。该研究为CLL免疫治疗提供了新靶点。

　　

慢性淋巴细胞白血病(CLL)作为最常见的成人白血病类型，其临床进程呈现高度异质性。尽管近年来BTK抑制剂等靶向药物显著改善了患者预后，但免疫功能障碍导致的治疗抵抗和继发恶性肿瘤仍是主要死因。特别值得注意的是，与其他血液肿瘤不同，针对PD-1/PD-L1等经典免疫检查点的阻断疗法在CLL中收效甚微，这提示我们亟需探索新的免疫调节机制。

在这样的背景下，来自西班牙阿斯图里亚斯中央大学医院等机构的研究团队将目光投向了新兴免疫检查点LILRB4（又称ILT3）。该分子在急性髓系白血病中已被证实具有免疫抑制功能，但在CLL中的生物学意义尚不明确。研究人员通过多中心队列研究和分子实验，系统揭示了LILRB4在CLL免疫微环境调控中的关键作用，相关成果发表在《Biomedicine》杂志。

研究采用了126例初治CLL患者的外周血样本和15例健康对照，主要运用流式细胞术检测表面LILRB4表达，通过公共数据库(GSE22762等)进行生物信息学验证，采用钙黄绿素释放实验评估NK/T细胞毒性，并建立体外迁移模型。此外，通过ELISA检测血清sLILRB4水平，结合RT-PCR分析选择性剪接变异体。

研究结果部分首先揭示：LILRB4在CLL恶性B细胞（CD19⁺
CD5⁺
）特异性高表达，而在健康B细胞中几乎检测不到。通过分期分析发现，晚期Rai/Binet分期患者LILRB4表达显著升高（p<0.01），且表达水平与疾病进展速度呈正相关。RNA-seq数据证实，高LILRB4表达组患者中位治疗间隔时间缩短60%，总生存期降低3.15倍（p<0.005）。

关于LILRB4的细胞分布特征，研究发现增殖性亚群（CXCR4^Dim
CD5^Bright
）的LILRB4表达量是静止亚群的7倍（p<0.0001）。单细胞转录组分析显示，该亚群同时高表达TLR9等激活相关基因。体外实验证实，TLR9激动剂CpG可诱导LILRB4上调2.7倍，而BTK抑制剂依鲁替尼能逆转这一效应，提示微环境激活信号通过TLR9-BTK轴调控LILRB4表达。

功能实验方面，LILRB4阻断抗体使NK细胞对MEC-1细胞系的杀伤率提升40%，与利妥昔单抗联用时抗体依赖性细胞毒性(ADCC)增强更显著（p<0.001）。在患者原代细胞中，LILRB4抑制使CD3/CD19双特异性抗体诱导的T细胞毒性提高35%。值得注意的是，CpG激活的肿瘤细胞表现出更强的免疫抵抗性，而LILRB4阻断可部分恢复细胞毒性，这解释了增殖中心微环境中免疫逃逸的机制。

研究还发现，72%患者血清sLILRB4水平显著高于健康对照（325.7 vs 160.5 pg/mL）。ROC曲线分析显示，sLILRB4诊断CLL的AUC达0.919（敏感性80.3%，特异性86.7%）。特别具有临床意义的是，继发恶性肿瘤患者sLILRB4水平较未发生者高51%（p<0.001），其预测继发肿瘤的AUC为0.81。分子机制研究表明，约78%患者存在LILRB4选择性剪接，产生缺失跨膜区的可溶性异构体。

在讨论环节，作者指出这项研究首次系统阐明了LILRB4在CLL中的双重作用：既通过SHIP-1抑制BCR信号维持肿瘤细胞静息状态，又在激活后通过免疫抑制促进疾病进展。这种"双刃剑"特性解释了为何靶向治疗早期可能出现淋巴细胞增多现象。研究创新性地将sLILRB4与继发肿瘤风险相关联，为临床监测提供了简便的生物标志物。

该研究的临床转化价值主要体现在三方面：首先，LILRB4可作为识别高危患者的分子标志；其次，其阻断策略可能增强现有免疫疗法（如CAR-T）的疗效；最后，sLILRB4监测有助于早期发现继发肿瘤。未来研究需在动物模型中验证LILRB4抗体的治疗效果，并探索其与BTK抑制剂的协同作用。这些发现为改善CLL免疫治疗困境提供了新思路，也为理解肿瘤微环境动态调控提供了重要启示。