靶向PD-L1棕榈酰化的纳米胶束联合化疗逆转PD-L1抗体耐药肿瘤的免疫抑制微环境

本研究针对PD-L1抗体治疗耐药性肿瘤中细胞表面和外泌体PD-L1持续补充导致的免疫抑制难题，开发了一种基于2-溴棕榈酸（2-BP）破坏PD-L1棕榈酰化修饰的pH响应型胶束（H-R@2-BP@DDP），联合顺铂（DDP）实现双途径PD-L1清除。该纳米系统通过靶向递送和肿瘤微环境（TME）响应释放，显著抑制黑色素瘤生长、术后复发和转移，并诱导长效T细胞记忆。发表于《Journal of Controlled Release》的研究为PD-L1抗体耐药肿瘤提供了新型联合治疗范式。

　　

免疫治疗革命性地改变了癌症治疗格局，但PD-L1抗体疗法在黑色素瘤等"冷肿瘤"中响应率不足30%，其核心瓶颈在于肿瘤细胞通过持续补充细胞表面PD-L1和外泌体PD-L1形成双重免疫逃逸机制。更棘手的是，外泌体PD-L1可随淋巴循环扩散至肿瘤引流淋巴结（TDLN），系统性抑制T细胞功能。传统基因敲除虽能阻断PD-L1表达，但存在不可逆风险。面对这一挑战，西安交通大学的研究团队独辟蹊径，将目光聚焦于PD-L1的翻译后修饰（PTMs）——棕榈酰化这一可药化靶点，开发出兼具精准递送与协同治疗功能的纳米武器。

研究团队首先证实棕榈酰化抑制剂2-BP能通过溶酶体途径同时降解细胞表面和外泌体PD-L1（Western blot显示处理组PD-L1降低>60%）。为突破游离药物靶向性差的问题，他们设计出由透明质酸（HA）和罗丹明110（Rho110）通过二硫键偶联的两亲性聚合物（H-R），该载体具有三大智能特性：CD44介导的主动靶向（流式显示预处理HA使肿瘤细胞摄取量下降75%）、谷胱甘肽（GSH）响应性释药（10 mM GSH条件下48小时释药率达80%）、以及EPR效应增强的肿瘤蓄积（活体成像显示12小时肿瘤区荧光强度达峰值）。

在B16F10黑色素瘤模型中，负载2-BP和DDP的纳米胶束（H-R@2-BP@DDP）展现出三重协同机制：通过2-BP阻断PD-L1棕榈酰化，使肿瘤细胞PD-L1膜定位减少>50%（免疫荧光验证），外泌体PD-L1分泌量下降68%（ELISA检测）；DDP诱导的免疫原性细胞死亡（ICD）使肿瘤浸润CD8⁺
T细胞比例提升至59.8%（流式分析），Treg细胞降至7.4%；更重要的是，该组合使TDLN中颗粒酶B⁺
细胞毒性T细胞增加3.2倍（t-SNE聚类分析）。这种"双管齐下"的策略使肿瘤体积缩小81.3%（对照组1555 mm³
vs 治疗组290 mm³
），术后复发率从100%降至12.5%，肺转移结节完全消失（H&E染色验证）。

关键技术方法包括：通过差速离心分离肿瘤外泌体（100,000×g超速离心），TEM/NTA表征纳米载体特性（粒径100 nm，电位-22 mV），流式细胞术分析免疫细胞亚群（CD3⁺
CD8⁺
细胞占比），以及活体成像监测药物分布（IVIS系统检测Rho110信号）。

研究结果部分揭示：

1. 棕榈酰化破坏双重清除PD-L1：2-BP处理使细胞和外泌体PD-L1蛋白水平分别降低62.4%和58.7%（Western blot），且该效应可被溶酶体抑制剂NH₄
   Cl逆转。
2. 纳米载体特性验证：H-R胶束在10 mM GSH中8小时内完全解离（动态光散射显示粒径从100 nm增至>500 nm），体外实验显示其使B16F10细胞凋亡率提升至78.1%（CCK-8检测）。
3. 免疫微环境重塑：治疗组肿瘤内Ki67⁺
   增殖细胞减少83%（免疫荧光），脾脏中央记忆T细胞（CD44⁺
   CD62L⁺
   ）比例达41.2%，二次攻击时50%小鼠实现完全防护。
4. 安全性评估：血清ALT/AST水平与对照组无统计学差异（p>0.05），心肝肾组织病理学未见异常。

这项研究开创性地将PTM调控与纳米递送技术相结合，其科学价值体现在三方面：首先，证实棕榈酰化是调控PD-L1膜定位和外泌体分泌的共同开关，为克服免疫治疗耐药提供新靶点；其次，设计的GSH响应型载体实现肿瘤特异性药物蓄积（AUC_肿瘤
/AUC_血液
=8.7），使2-BP治疗窗拓宽3倍；最后，建立的"局部免疫激活+系统免疫教育"模式，为转移性肿瘤治疗提供新思路。该成果被同行评价为"首次实现纳米载体介导的PTM精准调控与化疗免疫协同"，相关技术已申请国际PCT专利。

值得注意的是，研究仍存在外泌体清除动力学未量化、大型动物模型缺失等局限。未来研究可探索其他PTMs（如泛素化）的联合干预，或开发模块化载体实现时序控制释药。这项发表于《Journal of Controlled Release》的工作，为逆转PD-1/PD-L1抗体耐药提供了具有临床转化潜力的解决方案。