基于系统药理学与实验验证揭示柴胡通过SIRT1/AMPK/mTOR通路介导自噬缓解骨关节炎的分子机制

本研究针对骨关节炎(OA)治疗机制不明的临床难题，通过LC/MS成分分析、网络药理学筛选和分子对接技术，首次阐明柴胡(BR)活性成分柴胡皂苷D(ssD)通过调控SIRT1/AMPK/mTOR自噬通路，抑制软骨细胞衰老与凋亡，为中药治疗OA提供科学依据。

　　

骨关节炎(OA)作为全球三大健康威胁之一，其治疗长期依赖非甾体抗炎药，但存在胃肠道损伤、耐药性等严重副作用。软骨细胞作为关节软骨唯一细胞类型，其自噬功能障碍会导致细胞衰老、凋亡和基质降解，加速OA进展。传统中药柴胡(Bupleurum chinense DC., BR)在"少阳主骨"理论指导下用于OA治疗已有两千年历史，但其分子机制始终是未解之谜。

江苏省中医院的研究团队在《Journal of Ethnopharmacology》发表的研究，创新性整合LC/MS成分分析、网络药理学预测与实验验证三大技术体系。通过建立内侧半月板失稳OA小鼠模型，结合TCMSP、HADb和GeneCards数据库筛选靶点，运用Cytoscape构建蛋白互作网络，并采用分子对接验证关键靶点，最终通过体外实验证实BR通过调控自噬缓解OA的具体机制。

分析BR化学成分
LC/MS鉴定出BR提取物中的17种活性成分，其中柴胡皂苷D(ssD)因与核心靶点结合能最佳被确定为主要效应物质。

网络药理学预测
筛选出SIRT1、mTOR等17个核心靶标，构建"成分-靶点-通路"网络，揭示BR可能通过SIRT1/AMPK/mTOR通路调控自噬。

分子对接验证
ssD与SIRT1(-8.7 kcal/mol)、mTOR(-7.2 kcal/mol)等靶点具有强结合活性，证实网络预测可靠性。

体外实验证实
BR提取物显著上调软骨细胞中SIRT1、p-AMPK表达，抑制mTOR活性，促进自噬标志物LC3-II和BECLIN1表达，减少衰老相关分泌表型(SASP)和Ⅱ型胶原(COL2)降解。

这项研究首次系统阐明BR通过ssD-SIRT1/AMPK/mTOR轴调控软骨细胞自噬的分子机制，为"少阳主骨"理论提供现代科学阐释。该发现不仅为OA治疗提供新型自噬调节策略，更开创了传统中药现代化研究的新范式——将LC/MS成分分析、网络预测与实验验证相结合的研究框架，为其他中药复方研究提供方法论参考。研究证实BR通过多靶点、多通路协同作用的特点，相较于单靶点化学药物具有显著优势，为开发低毒高效的OA中药新药奠定基础。