新生儿异染性脑白质营养不良筛查新策略：干血斑中硫苷脂与芳基硫酸酯酶A活性检测方法的标准化与试剂制备

为解决异染性脑白质营养不良（MLD）早期诊断难题，国际MLD新生儿筛查联盟开发了基于干血斑（DBS）的双层筛查方案：通过LC-MS/MS检测16:0-和16:1-OH-硫苷脂水平，结合芳基硫酸酯酶A（ARSA）酶活性测定。该研究建立了标准化操作流程，在27,000例筛查中实现100%真阳性率，为全球新生儿筛查实验室提供了可复制的技术方案，推动基因治疗在无症状期的临床应用。

　　

异染性脑白质营养不良（Metachromatic leukodystrophy, MLD）是一种致命的溶酶体贮积症，由于芳基硫酸酯酶A（ARSA）缺乏导致硫苷脂在神经系统中蓄积，引发进行性脱髓鞘。尽管基因疗法atidarsagene autotemcel已在欧美获批，但治疗窗口仅限于症状前或极早期阶段。临床诊断时患者往往已错过最佳干预时机，这凸显了新生儿筛查（NBS）的紧迫性。国际MLD新生儿筛查联盟通过多国合作，开发出高效筛查方案，相关成果发表于《Molecular Genetics and Metabolism》。

研究采用LC-MS/MS技术检测干血斑中16:0-和16:1-OH-硫苷脂水平作为初筛指标，阳性样本进一步检测ARSA酶活性。关键技术包括：1）合成同位素标记内标（d₅
-16:0-和d₁₃
-16:1-OH-硫苷脂）；2）优化色谱分离条件；3）建立德国、美国等多中心10万例级验证队列；4）制定双重生物标志物cut-off值。

【Synthesis of 16:1-OH-sulfatides】
通过Schlenk技术合成d₁₃
-16:1-OH-硫苷脂内标，经HPLC纯化后用于质谱定量，解决了16:1-OH异构体检测标准品短缺问题。

【Sulfatide analysis】
华盛顿州27,000例筛查显示，联合检测16:0/16:1-OH-硫苷脂可将初筛假阳性率降低5-10倍。德国10万例试点成功识别3例MLD患儿，证实双重标志物策略的特异性达100%。

【ARSA enzymatic activity】
采用荧光底物法测定DBS中ARSA活性，临界值设定为正常值8%以下，与基因测序结果高度吻合。英国3687例预试验证明，增加16:1-OH检测可提升对晚婴型的敏感性。

该研究建立了首个国际共识的MLD筛查技术标准，其创新性体现在：1）首创硫苷脂亚型联合检测算法；2）实现微量DBS样本的双指标检测；3）通过国际合作验证人群适用性。值得注意的是，美国伊利诺伊州已将该方案纳入法定筛查项目，挪威于2025年启动常规筛查。这种产学研医协同模式为其他罕见病筛查提供了范本，特别是对需要早期干预的神经退行性疾病具有重要借鉴价值。研究者特别强调，该方法的经济性和可扩展性使其适合中低收入国家实施，将显著改善MLD患者的生存预后。