利用RfxCas13d精准靶向Progerin mRNA：哈钦森-吉尔福德早衰综合征治疗新策略

为解决哈钦森-吉尔福德早衰综合征（HGPS）这一由LMNA基因点突变导致progerin异常积累的致命疾病，研究人员通过RfxCas13d技术特异性靶向progerin mRNA连接区，实现选择性敲降而不影响正常lamin A表达。该研究在细胞和LMNAG608G/G608G 小鼠模型中成功逆转衰老表型，为RNA异常剪接疾病提供新型治疗范式。

　　

哈钦森-吉尔福德早衰综合征（HGPS）是一种令人心碎的疾病，患儿在童年时期就表现出加速衰老的特征，平均寿命仅14岁。这种罕见遗传病的罪魁祸首是LMNA基因上一个看似微小的点突变——c.1824C>T（记作LMNA^G608G
），它导致异常剪接产生毒性蛋白progerin。尽管科学家们已发现progerin会破坏细胞核结构、诱发DNA损伤和线粒体功能障碍，但传统基因疗法难以区分progerin与正常lamin A蛋白，使得治疗陷入僵局。

为突破这一困境，研究人员将目光投向CRISPR-Cas13系统的新成员RfxCas13d。这种RNA靶向工具能像“分子剪刀”一样精确切割特定RNA序列。研究团队设计了一种创新策略：针对progerin mRNA特有的外显子11-12连接区设计向导RNA（gRNA），使RfxCas13d仅降解异常转录本而不影响正常lamin A。

关键技术包括：1）生物信息学预测progerin特异性靶点；2）构建RfxCas13d-gRNA系统并在HGPS患者成纤维细胞中验证效率；3）使用LMNA^G608G/G608G
小鼠模型（源自美国早衰研究基金会资源库）进行体内治疗评估；4）通过RNA测序（RNA-seq）、衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色等方法多维度评估疗效。

特异性靶向实现高效敲降
通过对比不同gRNA设计，研究发现针对外显子连接区的gRNA-3使progerin mRNA水平降低78%，而lamin A表达完全不受影响。电镜观察显示治疗后细胞核膜异常褶皱显著改善。

逆转核心衰老表型
治疗组细胞中衰老标志物SA-β-gal阳性率下降62%，线粒体膜电位恢复至正常水平85%。值得注意的是，γ-H2AX（DNA损伤标记物） foci减少91%，证实RfxCas13d能修复progerin引发的基因组不稳定。

动物模型验证治疗潜力
在LMNA^G608G/G608G
小鼠中，静脉注射RfxCas13d-gRNA复合物使血管平滑肌细胞progerin降低65%。治疗8周后，小鼠体重增长曲线接近野生型，血管僵硬指数改善40%，存活期延长28%。组织学分析显示主动脉中膜厚度减少32%，达到统计学显著水平。

这项研究开创性地证明：基于RfxCas13d的RNA靶向疗法可精确区分单核苷酸差异产生的异常剪接体。其重要意义在于：1）首次实现progerin/lamin A的精准区分治疗；2）为其他RNA剪接异常疾病（如某些肌营养不良症）提供通用治疗框架；3）规避传统DNA编辑的脱靶风险，具有更高安全性。论文发表于《Molecular Therapy》时，审稿人特别指出该策略“重新定义了CRISPR技术在单碱基分辨率下的治疗潜力”。