新型CD3ε融合受体赋能TCR缺失型通用CAR-T细胞联合T细胞衔接器实现多抗原靶向治疗

为解决异质性抗原表达导致的肿瘤复发和TCR缺失型通用CAR-T细胞无法协同CD3靶向T细胞衔接器(TCEs)的问题，研究人员通过诱导多能干细胞(iPSC)技术构建了表达CD3ε融合受体(CD3FR)的CAR iT细胞。该研究证实CD3FR+ CAR iT细胞能有效介导TCEs的多抗原靶向作用，并在体内外展现协同抗肿瘤活性，为克服抗原逃逸提供了创新解决方案。

　　

在血液系统恶性肿瘤治疗领域，嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法已取得显著临床成效，但肿瘤细胞的异质性抗原表达常导致治疗后的抗原逃逸现象。更棘手的是，为预防移植物抗宿主病(GvHD)而删除T细胞受体(TCR)的通用型CAR-T细胞，会因表面CD3复合物的缺失丧失与CD3靶向T细胞衔接器(TCEs)的协同作用——这正是当前克服肿瘤异质性的关键策略之一。

为突破这一技术瓶颈，研究人员利用诱导多能干细胞(iPSC)平台开展创新性研究。该技术不仅能实现多重基因编辑，更提供了可再生的"现货型"细胞治疗原料。通过构建表达CD3ε融合受体(CD3FR)的TCR缺失型CAR iT细胞，研究团队成功恢复了CD3信号通路功能，使这类通用型细胞疗法重新获得协同TCEs的能力。相关成果发表在《Molecular Therapy》期刊。

研究主要采用三项关键技术：iPSC定向分化为T细胞的技术体系、CD3FR的基因工程改造（保留CD3ε胞内结构域并融合跨膜蛋白）、以及分泌型TCEs的自分泌表达系统。体外实验使用混合肿瘤细胞系模拟抗原异质性环境，体内研究则采用异种移植瘤模型评估治疗效果。

CD3FR在iPSC衍生T细胞中的功能性表达
通过基因编辑使iPSC分化的CAR iT细胞稳定表达CD3FR，流式细胞术证实其表面表达水平与天然CD3相当。磷酸化流式检测显示CD3FR能正常传导TCR样激活信号，为TCEs提供作用靶点。

多抗原协同靶向作用验证
在混合了CD19⁺
和BCMA⁺
肿瘤细胞的共培养体系中，CD3FR⁺
CAR iT细胞联合双特异性TCEs展现出显著强于传统CAR-T的细胞毒性（p<0.001），72小时清除率达98%。活体成像显示该组合可完全抑制异质性肿瘤的生长。

自分泌TCEs系统的构建
进一步改造的CD3FR⁺
CAR iT细胞能持续分泌抗CD3/抗肿瘤抗原双特异性抗体。质谱分析证实其分泌的TCEs具有正确结构，无需外源补充即可激活细胞毒性，在模拟临床给药间隔的实验中也维持了持续杀伤效果。

这项研究开创性地解决了通用型CAR-T疗法领域两大核心难题：通过CD3FR设计恢复了TCR缺失细胞的TCEs协同能力，借助iPSC技术平台实现了可规模化生产的"现货型"治疗产品。更重要的是，自分泌TCEs系统的成功构建，不仅简化了临床给药方案，更通过模拟生理性免疫突触形成机制，显著提升了对抗原异质性肿瘤的清除效率。该技术路线为实体瘤治疗中的抗原逃逸问题提供了新的解决思路，标志着通用型细胞疗法开发进入可多靶点协同的新阶段。