外泌体来源的hsa_circ_0007132通过抑制NONO蛋白泛素化降解促进肝癌仑伐替尼耐药

肝癌患者面临仑伐替尼(LR)耐药的临床困境，中山大学附属第三医院团队通过外泌体circRNA测序鉴定出hsa_circ_0007132/NONO/ZEB1调控轴。研究发现该环状RNA通过结合NONO蛋白抑制其泛素化降解，增强ZEB1介导的上皮-间质转化(EMT)，为逆转LR提供了新靶点。

　　

肝癌作为全球第六大恶性肿瘤，其发病率在过去十年呈持续上升趋势。仑伐替尼作为晚期肝癌一线治疗药物，耐药性(LR)成为制约疗效的关键瓶颈。近年研究发现外泌体环状RNA(circRNA)在肿瘤耐药中起重要作用，但其在LR中的机制尚未阐明。

中山大学附属第三医院团队通过血清外泌体circRNA测序，发现hsa_circ_0007132在疾病进展(PD)患者中显著高表达。研究采用LR细胞系进行体内外实验，证实该circRNA通过结合NONO蛋白抑制其泛素化降解，增强NONO介导的ZEB1 mRNA核输出，最终促进EMT和LR。这项发表于《Non-coding RNA Research》的研究揭示了外泌体circRNA调控LR的新机制。

关键技术包括：从55对肝癌组织样本中筛选差异表达circRNA；建立裸鼠肺转移模型验证功能；RNA pull-down和免疫共沉淀(Co-IP)鉴定RNA-蛋白相互作用；蛋白酶体抑制剂MG132处理验证蛋白稳定性；临床样本生存分析等。

【2.1节】通过外泌体测序和GEO数据库交叉分析，锁定hsa_circ_0007132在LR患者血清外泌体中特异性高表达。RNase R消化和放线菌素D实验证实其环状结构稳定性。

【2.2节】透射电镜显示肝癌细胞分泌80-200nm外泌体，携带Alix/CD63/TSG101标志物。55例患者组织检测显示hsa_circ_0007132高表达与较短无复发生存期(RFS)显著相关。

【2.3节】功能实验表明敲减hsa_circ_0007132使LR细胞IC₅₀
值降低50%，外泌体共培养可传递耐药表型。Transwell实验证实其通过增强迁移侵袭能力促进LR。

【2.4节】质谱分析鉴定NONO为关键互作蛋白，AlphaFold3预测分子结合域。免疫荧光显示二者在核质共定位，而SFPQ蛋白无相互作用。

【2.5节】CHX追踪实验显示hsa_circ_0007132延长NONO半衰期。MG132处理证实其通过泛素-蛋白酶体途径调控NONO降解。RIP实验验证NONO与ZEB1 mRNA结合。

【2.6-2.7节】裸鼠实验证实hsa_circ_0007132促进肺转移，而敲除NONO可逆转该效应。TCGA数据分析显示NONO/ZEB1高表达与不良预后相关。

该研究首次揭示外泌体hsa_circ_0007132通过"分子胶水"机制稳定NONO蛋白，激活ZEB1/EMT通路驱动LR。相较于既往发现的ceRNA机制，本研究创新性提出circRNA直接调控蛋白稳定性的新模式。临床意义在于：①为LR无创诊断提供外泌体标志物；②揭示靶向NONO泛素化是克服耐药的新策略；③证实外泌体circRNA可作为耐药表型传递载体。团队指出未来需进一步鉴定参与NONO泛素化的E3连接酶，为开发靶向药物奠定基础。