综述：肺炎支原体：已知病原体的诊断方法演进

这篇综述系统回顾了肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae）的诊断技术进展，重点分析了培养法、血清学（IgM/IgG）和核酸扩增检测（NAAT）的性能差异，探讨了分子分型与全基因组测序（WGS）在流行病学监测和耐药基因（如MRMP）检测中的应用价值，为亚太地区（尤其是澳大利亚）的临床诊疗和抗菌药物管理（AMS）提供了循证依据。

　　

Abstract

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae）作为社区获得性肺炎（CAP）的重要病原体，其诊断技术正经历从传统培养到分子检测的变革。该综述对比了培养法、血清学（如补体结合试验）与实时荧光定量PCR（qPCR）等核酸扩增检测（NAAT）的灵敏度差异，指出NAAT因其高吞吐量和快速性成为急性感染诊断的金标准。值得注意的是，分子分型技术（如P1黏附蛋白基因分型）和全基因组测序（WGS）在追踪周期性流行（4-7年间隔）及大环内酯耐药菌株（MRMP）中展现出独特价值，而澳大利亚目前尚缺乏相关耐药性数据。

Introduction

这种缺乏细胞壁的微小细菌不仅引发"非典型肺炎"，还可导致神经系统并发症等肺外表现。尽管健康人群上呼吸道可携带该菌，但其在儿童CAP中占比高达10%-40%流行期。诊断挑战在于：临床症状与其他呼吸道感染重叠，而传统血清学需配对血清（急性期/恢复期），且存在假阳性风险。澳大利亚非强制性报告制度导致流行病学数据缺失，凸显NAAT普及前的诊断空白。

Objectives and methods

通过分析澳大利亚皇家病理学家学会质量评估计划（RCPAQAP）数据，综述横向比较了7种主流NAAT试剂盒的Ct值差异，并提出基于23S rRNA基因突变（A2063G等）的MRMP快速筛查方案。

Epidemiology and clinical aspects

最新新南威尔士州数据显示，2019年肺炎支原体检出率骤增至15%，符合7年流行周期规律。儿童患者更易出现难治性肺炎，这与亚洲地区报告的MRMP高耐药率（>80%）形成警示对比。

Laboratory testing

痰液样本qPCR灵敏度最高（92% vs 鼻咽拭子78%），但儿童采集困难。SP4培养基培养需21天，阳性率不足60%，而直接免疫荧光法因交叉反应已淘汰。

Serology

IgM单次检测特异性仅65%，而IgG配对血清（间隔2周）虽为确诊标准，却延误治疗决策。化学发光法（CLIA）将窗口期缩短至5-7天，但类风湿因子可致假阳性。

Nucleic acid amplification testing

多重PCR面板（FilmArray等）实现6小时内同步检测16种呼吸道病原体，但靶基因选择影响灵敏度：16S rRNA保守但丰度低，P1基因变异率高需设计多重引物。

Next-generation sequencing

宏基因组测序（mNGS）在2019年悉尼儿童脑炎暴发中意外检出肺炎支原体，揭示其神经侵袭潜力。纳米孔测序可在8小时内完成23S rRNA耐药突变分析。

Detection of AMR

表型药敏试验需特殊培养基，而ARMS-PCR可快速检测A2063G突变。日本研究发现，MRMP感染者发热持续时间延长3.5天（p<0.01）。

Molecular typing methods

MLVA分型（MIRU-VNTR）显示2012年澳大利亚流行株属P1基因型2变异体，与亚洲流行株存在基因重组证据。

Discussion and updates in treatment

澳大利亚指南推荐多西环素（7天）作为>8岁患者一线用药，但儿童超说明书使用阿奇霉素需权衡耐药风险。动物模型显示，氟喹诺酮类可穿透血脑屏障，适用于神经系统并发症。

Future directions

建立全国性MRMP监测网络迫在眉睫，而微滴式数字PCR（ddPCR）有望将检测限降低至0.5拷贝/μl。针对P1黏附蛋白的mRNA疫苗正在临床前评估中。

Conclusion

肺炎支原体诊断已进入分子时代，但耐药监测与快速诊断技术研发仍需突破。亚太地区亟需本土化流行病学数据以优化诊疗策略，而WGS技术将为理解其周期性流行规律提供新视角。