冻干间充质干细胞分泌组（lyosecretome）治疗骨关节炎的临床评估：犬类对照试验与马匹安全性初步研究

本研究针对骨关节炎（OA）治疗中缺乏长期有效方案的问题，由意大利IZSLER研究所团队通过GMP标准化流程制备冻干间充质干细胞分泌组（lyosecretome），在26只OA犬中开展双盲随机对照试验，并评估5例马匹治疗安全性。结果显示lyosecretome联合透明质酸显著改善犬类跛行和运动能力（p<0.05），蛋白质组学揭示其含ITIH3/4（抑制透明质酸酶）、Galectin-1（抗炎）等关键活性成分，为跨物种OA治疗提供新策略。成果发表于《International Journal of Pharmaceutics》。

　　

骨关节炎（Osteoarthritis, OA）是人类和动物共同面临的健康挑战，全球约40%的犬、50%的老年马和87%的55-65岁人类存在OA病变。这种关节退行性疾病不仅降低生活质量，还造成巨大经济负担。当前治疗以非甾体抗炎药（NSAIDs）和透明质酸注射为主，但仅能缓解症状且伴随副作用。间充质干细胞（Mesenchymal Stromal Cells, MSCs）及其分泌组（secretome）因具有抗炎和软骨修复潜力成为研究热点，但此前研究存在三大瓶颈：缺乏符合药品生产质量管理规范（GMP）的标准化制剂、动物模型与自然发病差异大、活性成分作用机制不明确。

意大利IZSLER研究所的Priscilla Berni团队在《International Journal of Pharmaceutics》发表的研究，首次通过GMP标准化流程制备冻干间充质干细胞分泌组（lyosecretome），在自然发病OA犬和马中开展系统评估。研究采用三步技术路线：首先通过超滤浓缩和冻干工艺制备犬/马源lyosecretome（含5 kDa以上蛋白质和细胞外囊泡EVs）；其次在26只OA犬中实施双盲随机对照试验（lyosecretome组19关节 vs 甘露醇对照组17关节），结合80天随访和赫尔辛基慢性疼痛指数（HCPI）问卷；最后通过高分辨率质谱（LC-MS/MS）解析犬lyosecretome的799种蛋白质及其互作网络。

3.1 标准化制剂突破
研究采用5 kDa超滤膜保留完整分泌组（含EVs和可溶性蛋白），冻干后制剂在-20°C可保存48个月。纳米颗粒追踪分析（NTA）显示EVs粒径分布稳定（d₅₀
=127-148 nm），批次间蛋白含量差异（9.3-24.2 μg/mg）反映平面培养的固有变异性。

3.2 跨物种安全性验证
马匹试验中，4例接受0.5-2×10⁶
细胞当量lyosecretome的患者仅出现48小时内自限性关节肿胀（与对照组相似）；犬试验中38.5%病例出现短暂关节反应，但严重程度与OA初始分级正相关（p<0.01）。

3.3 犬模型疗效显著
在临床评分>11分的单侧OA犬中，lyosecretome组表现出时间依赖性改善（p=0.016），尤其在跛行（3-5级病例p=0.004）和功能恢复方面优于对照组。主人问卷显示治疗组犬更愿意行走（p=0.003）、玩耍（p=0.0003）和运动后恢复（p=0.005）。

3.4 分子机制解析
蛋白质组学发现lyosecretome富含三大功能模块：①ITIH3/4（通过结合透明质酸抑制其降解）、Galectin-1（调控IL-4/10抗炎通路）；②LUM/DCN/BGN（调控软骨ECM稳态）；③PRDX1（抗氧化应激）。网络拓扑分析鉴定出HSPA8、VTN等枢纽蛋白，可能通过调节应激反应和免疫微环境发挥作用。

这项研究首次证明符合GMP标准的lyosecretome在自然发病OA动物中的安全性和疗效优势。其创新性体现在：①建立跨物种可转化的制剂标准（冻干工艺+透明质酸载体）；②揭示ITIH3/4-Galectin-1双通路协同作用；③为"One Health"医学模式提供范例——犬马模型与人类OA共享90%的病理机制，lyosecretome中保守的ECM调控蛋白（如II型胶原）可能成为跨物种治疗靶点。未来需扩大样本验证最佳剂量，并探索EVs与可溶性蛋白的协同机制。