基于增强质谱数据采集与分析策略的天然产物中寡糖快速表征研究——以桑椹为例

本研究针对天然产物中寡糖（OSs）快速表征难题，创新性提出结合数据非依赖采集（DIA）、质量缺陷过滤（MDF）及前体离子列表依赖采集（PIL-DDA）的质谱策略，结合三种衍生化标记技术，成功从桑椹中鉴定79种OSs（含15种血浆吸收成分），为天然产物功能成分的体内外分析提供通用方法学范式。

　　

在天然产物研究领域，寡糖（Oligosaccharides, OSs）因其结构多样性和广泛的生物活性（如抗炎、免疫调节等）备受关注。然而，这些分子缺乏发色团、电离效率低，且生物样本中干扰复杂，导致其快速表征成为长期技术瓶颈。以桑椹（Mori Fructus, MF）为例，虽已知其富含具有降血糖、抗氧化活性的OSs，但缺乏系统性的成分鉴定与吸收代谢研究。传统方法依赖单一衍生化试剂，难以覆盖不同类型OSs，而质谱数据分析中又面临海量信息筛选难题。

为解决这一挑战，暨南大学的研究团队开发了一套创新的质谱分析策略，通过整合多种衍生化标记与智能数据采集技术，首次实现桑椹中OSs的高通量鉴定及体内吸收轨迹追踪。该成果发表于《Journal of Food Composition and Analysis》，为天然产物功能成分研究提供了方法论突破。

关键技术包括：1）采用三种衍生化试剂（PMP、ABEE、ProA）分别标记中性、含氮及酸性OSs，提升电离效率；2）结合DIA全扫描与MDF算法自动过滤非目标离子，生成前体离子列表（PIL）；3）基于PIL的DDA触发二级质谱采集，确保碎片信息完整性；4）通过标准品建立特征碎片离子（CFIs）和中性丢失（NLs）数据库，实现OSs分类鉴定。实验样本涵盖14批次中国不同产地的桑椹及其大鼠灌胃后的肠内容物与血浆。

研究结果
Fragmentation patterns of reference standards by different labeling techniques
通过分析29种还原性OSs标准品的MS²
谱，发现PMP标记最适合中性OSs（产生Y/Z型碎片），ProA对含氨基OSs灵敏度最高，而ABEE可有效捕获酸性OSs的[M-H]^-
离子。非还原性OSs则通过交叉环裂解产生特异性片段。

Discussion
研究发现桑椹中Rha1GalA1Rha（P9）是主要吸收入血成分，其暴露量与肠道菌群代谢相关。通过建立四类OSs（中性还原型、含氮还原型、酸性还原型、中性非还原型）的鉴定标准，显著降低生物样本中的假阳性率。

Conclusion
该策略成功鉴定桑椹中79种OSs（含68种肠道原型成分和15种血浆成分），首次揭示其体内吸收特征。研究不仅为桑椹作为功能食品开发提供科学依据，更创立了适用于复杂基质中OSs分析的通用技术框架，推动天然产物活性成分研究向精准化发展。

重要意义
突破传统方法对OSs结构类型的覆盖局限，通过多标签协同与智能数据挖掘实现高通量表征；首次阐明桑椹OSs的体内命运，为功能食品功效评价提供新视角；建立的CFIs/NLs筛选标准可推广至其他NP研究，具有重要方法论价值。