基于数字微滴PCR的循环肿瘤DNA微卫星不稳定性分析在微卫星不稳定性结直肠癌中的预后与预测价值

为解决dMMR/MSI结直肠癌患者免疫检查点抑制剂(ICI)疗效预测难题，法国普瓦捷大学医院团队通过前瞻性ADI-MSI研究，利用数字微滴PCR(ddPCR)检测ctDNA-MSI水平。研究发现基线ctDNA-MSI与预后显著相关，治疗期间ctDNA-MSI动态变化较cfDNA更能准确预测治疗反应(P=0.006)和生存结局(PFS/OS P<0.05)，为个体化治疗决策提供了新型液体活检标志物。

　　

在肿瘤精准医疗时代，微卫星不稳定性(MSI)结直肠癌因其独特的生物学特性成为免疫治疗的热点。尽管免疫检查点抑制剂(ICI)对错配修复缺陷(dMMR)/MSI肿瘤展现出显著疗效，但约40%-60%患者存在原发或继发耐药，且缺乏强效预测标志物。传统影像学评估存在滞后性，而组织活检难以实现动态监测。循环肿瘤DNA(ctDNA)作为"液体活检"的重要组成，能否通过微卫星不稳定性分析(ctDNA-MSI)实现疗效预测，成为亟待解决的科学问题。

法国普瓦捷大学医院团队在《Laboratory Investigation》发表前瞻性ADI-MSI研究，创新性地采用数字微滴PCR(ddPCR)技术检测Pentaplex panel中5个微卫星标记物(BAT25/BAT26/NR21/NR24/Mono27)，对54例dMMR/MSI结直肠癌患者治疗前后的108份血浆样本进行ctDNA-MSI定量分析。研究通过QIAamp试剂盒提取cfDNA，使用BioRad QX200平台进行ddPCR检测，设定≥3个阳性微滴为阳性阈值，并计算Mono27等位基因频率(AF)反映ctDNA-MSI水平。

在"Population"部分，研究纳入77.8%转移性患者，92.6%肿瘤经免疫组化(IHC)证实dMMR状态。基线分析显示，未切除原发灶患者ctDNA-MSI水平显著更高(17.8% vs 4.8%, P<0.01)，肝转移患者达16.7% vs 无转移者6.1%(P=0.05)。"Circulating Tumor DNA--Microsatellite Instability at Baseline Is Associated With Prognosis"部分揭示，基线ctDNA-MSI阳性患者OS显著缩短(20.0月 vs 未达到, HR=5.65)，高基线cfDNA和ctDNA-MSI水平均与较差PFS/OS显著相关(HR=1.01-1.04, P≤0.01)。

"Circulating Tumor DNA--Microsatellite Instability Kinetics Is Associated With Treatment Efficacy"部分最具临床价值。治疗期间ctDNA-MSI动态变化分为三组：升高组(17.3%)、降低组(40.4%)和持续阴性组(42.3%)。令人瞩目的是，升高组24个月PFS为0%，而降低组和阴性组分别达53.0%和77.0%(P<0.001)。多因素分析证实ctDNA-MSI动力学是PFS的独立预测因子(aHR=7.93, 95%CI 2.23-28.21)，其预测效能显著优于cfDNA动力学(P=0.006 vs 0.557)。典型病例显示1例免疫治疗相关肺炎患者，虽cfDNA因炎症反应升高至550ng/mL，但ctDNA-MSI持续阴性与其持续完全缓解(CR)状态吻合。

讨论部分强调，这是迄今最大规模验证ddPCR检测ctDNA-MSI预测价值的研究。相较于二代测序(NGS)53.5%-71.4%的敏感性，ddPCR对微卫星标志物的高灵敏度使其无需配对正常样本即可实现0.19%低AF检测。研究创新点在于：首次证实ctDNA-MSI动力学较cfDNA更能准确区分真假进展；提出治疗早期(42天)ctDNA-MSI变化可预测长期生存；为ICI治疗持续时间个性化决策提供依据。局限性在于样本量较小(54例)，但前瞻性设计和32.6个月长随访增强了证据强度。

这项研究为dMMR/MSI结直肠癌的精准治疗开辟了新路径：通过简便的血浆检测，ctDNA-MSI既可识别可能从ICI早期转换治疗中获益的原发耐药患者，也能为获得深度缓解者提供安全停药依据。未来需要在更大队列中验证这一标志物，并探索其与肿瘤突变负荷(TMB)等指标的联合预测价值，最终推动液体活检指导下的免疫治疗决策体系建立。