重新审视血液离心对凝血酶生成试验参数的影响：探索现行指南修订的可能性

本研究针对凝血酶生成试验(TGA)中双离心法操作繁琐、临床实验室难以普及的问题，系统评估了4种离心速度(1,700g/3,000g/10,000g)对低/高浓度触发剂(1pM TF/5pM TF)及血栓调节蛋白(TM)存在条件下的TGA参数影响。结果发现单次3,000g离心20分钟可替代现行双离心标准，为简化TGA临床实践提供重要依据。

　　

在凝血功能评估领域，凝血酶生成试验(TGA)被誉为"全球凝血检测的金标准"，能全面反映促凝与抗凝系统的动态平衡。然而这个充满潜力的检测技术却长期被困在实验室研究的象牙塔里，临床转化步履维艰。究其原因，现行指南要求的双离心样本制备流程（先2,500g离心全血15分钟，再2,500g离心血浆15分钟）犹如一道技术藩篱——不仅耗时费力，更与临床实验室常规的单离心操作格格不入。更棘手的是，已有流行病学研究显示，采用不同离心方案获得的TGA数据可能得出完全相反的结论：von Paridon团队发现内源性凝血酶潜能(ETP)升高与死亡率正相关，而de Laat-Kremers团队却报道了相反的关联性——这种"离心速度决定临床结论"的尴尬局面，暴露出TGA标准化进程中的致命短板。

来自中国的研究团队在《Practical Laboratory Medicine》发表的这项研究直击这一技术痛点。研究人员设计了一套精巧的实验方案：以20名健康志愿者为样本，在低浓度触发剂(1pM组织因子/1.0μM磷脂)和高浓度触发剂(5pM组织因子/5.0μM磷脂)条件下，系统比较了四种离心方案（包括指南推荐的双离心法）对TGA三大核心参数——滞后时间(Lag-time)、峰值凝血酶(Peak-thrombin)和ETP的影响。尤为重要的是，所有测试均设置了血栓调节蛋白(TM)存在/缺失的平行对照，以模拟体内真实的凝血调控环境。

关键技术方法包括：采用真空采血管采集枸橼酸化静脉血，四种离心方案处理血浆后液氮速冻；使用含荧光底物(Z-Gly-Gly-Arg-AMC)的自建TGA检测体系；通过Thrombinoscope软件分析凝血酶生成曲线；统计学采用Wilcoxon符号秩检验比较各离心组与参考方法的差异。

研究结果揭示出离心速度对TGA参数的差异化影响：

1. 滞后时间成为"最敏感指标"：1,700g低速离心使滞后时间缩短16-52%，而3,000g单离心仅造成2-11%偏差。这种效应在低浓度触发剂和TM存在时尤为显著，提示磷脂表面有效性对凝血启动阶段的决定性影响。
2. 峰值凝血酶和ETP展现"剂量依赖性抵抗"：仅当使用低浓度触发剂+TM时，1,700g离心才会引起ETP显著升高(21%)。而3,000g单离心对所有检测组合的ETP影响≤5%，证明高强度单离心足以控制血小板源性磷脂的干扰。
3. 冻融后高速离心方案的"双刃剑效应"：10,000g二次离心虽能清除冻融产生的血小板碎片，却导致ETP异常降低(18%)，揭示冷冻过程可能释放不可逆的促凝物质。

在讨论部分，作者提出了颠覆性的标准化建议：现行双离心指南应修订为单次3,000g离心20分钟。这一优化方案具有三重优势：首先，操作偏差控制在11%以内，满足临床可接受误差范围；其次，与自动化检测系统兼容，破解TGA临床推广的技术瓶颈；更重要的是，为流行病学研究提供了可比性保障——研究特别强调，任何TGA研究都必须配备相同离心条件处理的对照血浆，否则数据解读将陷入"离心速度决定论"的困局。

该研究也存在一定局限：未直接计数各方案下的残余血小板数；健康人群数据能否外推至病理状态尚待验证。但这些丝毫不减其临床价值——当3,000g离心机运转的那一刻，TGA技术或许终于敲开了临床实验室的大门。正如作者预言，这项研究可能成为凝血检测标准化进程中的"转折点"，让这个沉睡的"凝血功能全景相机"真正聚焦于患者诊疗。